发酵综合实验报告.doc

综合实验报告书 （2012 ~2013学年） 实 验 题 目 淀粉酶产生菌的选育及发酵条件研究 学院名称 生物与食品工程学院 专 业 （班 级） 姓 名 （学 号） 起 迄 日 期 2013.7.15—2013.7.26 指 导 教 师 2013年 7 月 26日 淀粉酶产生菌的选育及发酵条件研究 摘要：本实验采用透明圈法对菌种进行选育，并研究了碳氮比分别为4/1.7、6/1.7时发酵的情况。结果表明，随着发酵时间的增加，发酵液pH逐渐降低，菌体浓度增加，淀粉酶活增加，残糖量下降，最后都趋于平衡。碳氮比为6/1.7时更有利于菌体生长，表现为菌浓更高、酶活更高。 关键词：淀粉酶;选育;发酵 Abstract：In this study, transparent circle method for breeding bacteria and studied the carbon-nitrogen ratio was 4/1.7, 6/1.7 when fermentation situation. The results show that with the increase of fermentation time, fermentation broth pH decreases, cell concentration increased amylase increased, the amount of residual sugar down，eventually leveling.. N ratio is more conducive to bacterial growth when 6/1.7, showing a higher concentration of bacteria, enzyme higher. Key words：amylase;breeding;ferment 1 引言 α-淀粉酶可由微生物发酵产生，也可从植物和动物中提取，目前工业生产上都以微生物发酵法进行大规模生产α-淀粉酶。在1908年由细菌中生产出α-淀粉酶。1937年日本的福本获得了产生α-淀粉酶的枯草芽孢杆菌。第二次世界大战后，由于抗生素的发明，使得微生物工业大步前进，1949年α-淀粉酶开始采用深层通风培养法进行生产。1973年耐热性α-淀粉酶投入了生产。随着α-淀粉酶的用途日益扩大，产量日渐增多，生产水平也逐渐提高。近些年我国酶制剂行业发展较快，从1965年开始应用枯草芽孢杆菌BF-7658生产α-淀粉酶，如今国内生产酶制剂的厂家已发展到120多个，其中约有40％左右的工厂生产α-淀粉酶，产品也由单一的常温工业用α-淀粉酶，发展到现在既有工业用也有食品级，既有常温也有耐热的，剂型上有固体的也有液体的α-淀粉酶。 有实用价值的α-淀粉酶产生菌如下：枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、凝聚芽孢杆菌、淀粉液化芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、米曲霉、黑曲霉、拟内孢霉。虽然这些微生物都能产生α-淀粉酶，但不同菌株产生的酶在耐热性、作用的最适pH、对淀粉的水解程度以及产物的性质上均有差异。α-淀粉酶通常在pH 5．5～8是稳定的，大多数淀粉酶的最适温度是50～60℃，最适温度最低的是尖镰孢淀粉酶的25℃，最高的是地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的90℃。α-淀粉酶可分为耐热、耐酸、耐碱及耐盐酶，其中唯有耐热酶在工业上大规模使用，地衣芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌产生的α-淀粉酶的耐热性较强。 1915年，法国人利用枯草杆菌生产淀粉酶用于棉布脱浆。1937年日本福本也报告了细菌淀粉酶的生产，并应用制饴糖的液化剂和棉布脱浆，取得显著效果。我国在淀粉酶的生产、应用、研究中做了很多工作，如α-淀粉酶的菌种选育、工艺革新，糖化酶菌种采用补糖与pH的调节新工艺，β-淀粉酶高单位菌种选育，高温α-淀粉酶的研究等。目前淀粉酶的应用越来越广泛，现已扩大到食品加工，水果加工，酒精制造，酒类酿造，味精、酱油等调味品生产及淀粉加工、造纸和石油开采工业等方面。 2 材料与方法 2.1 菌种 地衣芽孢杆菌（B.lichentiformis）GZM1.182 2.2 试剂和培养基 （1）0.1%淀粉溶液：可溶性淀粉1g，KH2PO4 8.16g,配成1000ml溶液。 （2）淀粉水解实验用碘液：I2 1g,KI 2g,蒸馏水300ml，KI溶于少量水中，再将I2溶解于KI溶液中，补足水分即可。 （3）I2-KI溶液：0.6gKI,0.06g溶于1000ml0.05mol/LHCl中。 （4）生理盐水：称取0.85gNaCl，用去离子水定容至100ml，即为0.85%生理盐水。