消毒剂消毒效果验证方案..doc

验证方案的起草 起草人 部门 日期 验证方案的审批 审核人 部门 日期 验证方案的批准 批准人 批准日期 目 录 1 前言 2 职责 3 验证的方法及步骤 4 异常情况及偏差处理 . 验证结果评价及建议 6、再验证周期 前言 消毒剂主要使用在洁净控制区域，用于控制生产环境、设备表面等的微生物污染 的一种化学剂。由于没有一种消毒剂是完全理想的，因此有必要在实际工作中使用两种以上的消毒剂。交替使用在理论上有利于防止形成相同环境的分离菌或抑制细菌的适应性。本实验方案针对①75%乙醇、②1%新洁尔灭、③3%甲酚皂杀菌剂、④3%的过氧化氢溶液共4种消毒剂进行抑制或者杀灭微生物的效果确认。 1.1验证的目的 本验证的目的在于制定方法及可接受标准，来评价消毒剂对微生物的杀灭效果。 1.3验证的范围 75%乙醇、1%新洁尔灭、3%甲酚皂溶液、3%的H2O2 1.4验证内容： . 验证方法及步骤 3.1实验材料 3.3.1 菌株 1）细菌：金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌(ATCC15442) 大肠杆菌(ATCC25922) 伤寒杆菌(ATCC6539) （2）细菌芽孢：枯草杆菌芽孢 （3）真菌：白色念珠菌 3.3.2 培养基胨琼脂培养基(TSA).3.3 稀释液：1%蛋白胨-PBS 溶液 .3.4 中和剂：0.1%卵磷脂+1%吐温 80 溶液； 0. 5%硫代硫酸钠 3.3.5 无菌试管 .3.6 无菌平皿(90mm) .3.7消毒剂： 3.3.8移液器及配套无菌吸头:0-100ul，100-1000ul ①中和剂效力及毒性试验目的 在化学消毒试验中，达到规定消毒时间终点时，要求立即终止残留消毒剂的继续作用，以便准确检测出消毒体系中残留存活的微生物及其数量。因为消毒体系中残留的消毒剂，可能对微生物的生长繁殖具有一定抑制作用，从而可导致对杀菌效果偏高的错误判断，甚至产生假阴性结果。残留消毒剂的去除，可排除残留消毒剂对微生物的抑制，从而使试验获得正确结果。中和法是指在消毒剂与微生物作用到达规定时间的终点时，取样加于适宜种类和浓度的中和剂中，将残留消毒剂迅速中和，使其不再持续抑制或杀灭微生物的方法。本试验中所使用的中和剂必须既能有效抑制消毒剂的杀菌性（中和剂的效力试验）同时又不削弱微生物活力的恢复（中和剂的毒性试验）。 ②中和剂效力、毒性确认～cfu/ml的。 准备无菌试管6支，按试验操作步骤表分组进行操作。各组试昝20秒或在手掌上振敲80次，然后移取Iml混合液到平皿37℃下培养48小时后计数表一 中和剂效力、毒性确认 D 4.5ml中和产物液+0.5ml菌悬液 作用10min取0.5ml作用液 4.5ml中和剂试管中混匀，吸取1ml最终作用液于平皿中，做活菌计数。 观察中和产物，或未被完全中和的残留消毒剂对试验菌的生长繁殖是否有影响。 E 4.5ml稀释液+0.5ml菌悬液 作用10min 取0.5ml作用液 4.5ml稀释液试管中混匀，吸取1ml最终作用液于平皿中，做活菌计数。 作为菌数对照 F 分别吸取1ml中和剂和1ml灭菌0.9%氯化钠溶液于平皿中做活菌计数。 作阴性对照 应无菌落生长 备注 若菌落太多不能计数，则移取1ml上述混合物，到9ml灭菌注射的生理盐水中（稀释10倍），充分振荡后再移取1ml做平皿计数。 试验结果符合上述所有条件，所测中和剂才可判为合格。 3.3消毒剂杀菌效率确认 用第三代的菌悬液按1：10用9ml的稀释剂稀释5次，计数培养，大约70-80之间，以获得10-4-10-6数量级的菌悬液。 将最终稀释的10-4、10-5、10-6三个数量级，即三个稀释梯度的菌悬液，各取2份1ml均匀接种涂布在培养基平板上进行培养计数。 将涂布的6块平板在37℃进行培养，7天后进行读数，以确认稀释浓度。 3.3.3试验方法：4.5ml消毒剂+0.5ml菌悬液，作用10min， 取0.5ml作用液 ， 加到4.5ml中和剂试管中混匀，吸取1ml最终作用液于平皿中，做活菌计数。白色念珠菌23～28℃培养72 h后计数，其它菌液30～35℃培养48 h后计数。记录每个梯度1.0ml样品的菌落数（a1,a2）.3.5杀灭对数值计算 KL）＝对照组平均活菌浓度对数值-试验组活菌浓度对数值.3.6判定标准 3 判为合格。 根据实验结果进行计算，如果计算结果符合接受标准，即在一定的接触时间内，消毒剂能够使挑战菌水平下降99.9%（下降3个对数单位），则表明消毒剂能够进行日常消毒使用 3.4消毒剂的消毒效果现场考察