归纳第七章食品中常见病原菌微生物检验技术.ppt

检测步骤---分离 BP平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元素 丙酮酸钠是一种生长促进剂 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄的菌株有毒性，并使菌落产生黑色 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。 最新. * Baird－Parker氏培养基 - 成分 　　胰蛋白胨　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 10g 　　牛肉膏　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 5g 　　酵母膏　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 1g 　　丙酮酸钠　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 10g 　　甘氨酸　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 12g 　　氯化锂(LiCl·6H2O)　　　　　　　　 　　　　　 　　5g 　　琼脂　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 20g 　　蒸馏水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 950mL 　　PH7.5 最新. * Baird－Parker氏培养基 - 增菌剂的配法 　　30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚蹄酸钾溶液10mL混合，保存于冰箱内。 最新. * Baird－Parker氏培养基 - 制法 　　将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解。冷至25℃，校正pH。分装每瓶95mL，121℃高压灭菌15min。临用时加热溶化琼脂，冷至50℃，每95mL加入预热至50℃的卵黄亚蹄酸钾增菌剂5mL，摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48h。 最新. * 检测步骤---分离 在BP平板上其典型菌落为：圆形，光滑突起，湿润，直径2-3mm，颜色呈灰色到黑玉色，边缘常为淡色（米黄色或灰白色略带灰色或黄色的白色），周围为一混浊带，在其外缘常有一透明圈。用接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。 偶然会遇到不分解脂肪菌株，除无混浊带及透明圈外，其他外观基本相同。 最新. * B-P平板 最新. * Baird－Parker(BP培养基/贝尔德帕克平板) 用于凝固酶阳性葡萄球菌的分离和菌落计数用。 ￥7（90mm) 最新. * Baird－Parker平板是一种选择性培养基，在含有氮源的基础上，补充了促进细菌生长的丙酮酸钠，又含有抑制剂：亚碲酸钾，故有较好的选择性。但对于金葡萄球菌没有抑制，其能将亚碲酸钾还原为碲在菌落中心呈黑色，易于观察；加入卵黄，由于卵磷酯酶阳性特征，其菌落周围可出现一明显的沉淀环，以资区别。 最新. * 根据菌落形态，作出相应的处理或报告。例如：金黄色葡萄球菌呈圆形、有光泽隆起，中部黑色，边缘灰色有微透明的浑浊带；革兰阳性杆菌呈棕黑色，无光泽有时在培养48h后也出现浑浊带；酵母菌为白色无透明环。 最新. * 血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素，因此在血平板上产生明显的溶血环。 血平板上其典型菌落呈金黄色，有时也为白色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血圈。 最新. * 血平板 最新. * （5）革兰氏染色镜检 （6）血浆凝固酶试验 挑取Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落 1 个或以上，分别接种到 5 mL BHI 和营养琼脂斜面，36 ℃±1 ℃培养 18 h～24 h。 取新鲜配置兔血浆 0.5 mL，放入小试管中，再加入 BHI 培养物 0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，置 36 ℃±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。 也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36 ℃±1 ℃培养 18 h～48 h，重复试验。 最新. * 检测步骤--鉴定 金黄色葡萄球菌可以产生凝固酶，因此对其鉴别的主要实验是测定其凝固酶。 对于凝固不完全的菌株，可以通过一些其他实验来进一步确认，例如：厌氧葡萄糖发酵、溶葡萄球菌酶敏感性实验、耐热核酸酶实验等。 所有这些实验不能作为鉴别其产毒与否的依据。 最新. * 血浆凝固酶试验： 吸取1:4新鲜兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入培养24 h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5 mL，振荡摇匀，置 36±1℃温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝块,即将试管倒置或 倾斜时，呈现凝块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。 最新. * 血浆凝固酶试验 血浆凝固试验也可采用玻片法。把兔血浆滴加于载