高效液相色谱仪的原理及应用(共49张课件).pptx

高效液相色谱仪的原理及应用;高效液相色谱

highperformanceliquidchromatograph，HPLC;Agilent1100;气相色谱法：较易挥发、且热稳定的有机化合物。～20%

液相色谱法：用气相色谱法难以分析的物质，如难挥发、热不稳定、分子量大、具有生物活性的物质。～80%;?高效液相色谱法与经典液相色谱法;吸附色谱

分配色谱

离子交换色谱

排阻色谱;1)吸附色谱〔液-固〕;2)分配色谱〔液-液〕;3)离子交换色谱;4)排阻色谱〔又称凝胶色谱〕;1)正相色谱：

是由极性固定相和非极性（或弱极性）流动相所组成的色谱体系。其代表性的固定相是改性硅胶、氰基柱等，代表性的流动相是正己烷。

2)反相色谱：

由非极性固定相和极性流动相所组成的色谱体系，与正相色谱体系正好相反。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶(ODS柱），代表性的流动相是甲醇和乙腈。是当今HPLC最主要的分离模式。;应用最广，对大部分有机化合物有响应。

快(1-10mL/min)

100g对硝基苯酚加到试样中，混合均匀后进样，测得氯霉素峰面积是20，对硝基苯酚峰面积是120，已知氯霉素相对于对硝基苯酚的相对校正因子是1.

然后分别测量各个色谱的峰面积，以峰面积为纵坐标，标准苯并芘量为横坐标，绘制标准曲线。

小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；

05×(5/24.

95ug/10uL=0.

例：一含氯霉素试样，称取此样1.

(2)检测器：荧光检测器，激发波长369nm，荧光波长405nm。

紫外检测器的重要进展；

硅氧碳键型：≡Si—O—C

fi′=（Wi/20）/（0.

硅氧碳键型：≡Si—O—C

D-正丁醇；

(1)液相色谱仪：色谱柱：ODS柱，柱长250mm，Φ4mm；;第二节高效液相色谱仪的组成;一、输液系统;1、高压输液泵

主要部件之一，压力：150～350×105Pa。

为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。μL/min~几千mL/min

应具有压力平稳、流量稳定可调、耐腐蚀等特性;2、脱气装置

用于脱去流动相中的溶解气体，流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱。

脱气机、超声脱气、真空脱气等。;3、梯度淋洗装置;??度洗脱;;梯度洗脱;;气相色谱的程序升温;程序升温50~250℃，

8℃/min;流路中为高压力工作状态，

通常使用耐高压的六通阀进样装置：;色谱柱：填料：

C18色谱柱十八烷基硅基化学键合

到多孔硅胶或陶瓷微粒

SIL多孔硅胶微粒

XDB-C8辛基硅烷化学键合到

多孔硅胶微粒上;目前应用最广、性能最佳的固定相。

a.硅氧碳键型：≡Si—O—C

b.硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si—C

c.硅碳键型：≡Si—C

d.硅氮键型：≡Si—N;1、紫外检测器

应用最广，对大部分有机化合物有响应。;2、光电二极管阵列检测器DAD;3、荧光检测器;4、质谱检测器;一、定性分析

(1)保留值定性

(2)相对保留值定性

(3)与其他仪器联用;组分的峰面积越大,在样品中所占比例越大?;;相对校正因子fi?：某物质i与一选择的标准物质S的绝对校正因子之比:

相对校正因子只与检测器类型有关，而与色谱条件无关。

常用于作为标准物质S的有苯（热导检测器）

和庚烷（氢火焰离子化检测器）等。;2、内标法——标准物质在未知样内部;内标法的优点：;;;例：一含氯霉素试样，称取此样1.000g，以对硝基苯酚作内标，称取0.100g对硝基苯酚加到试样中，混合均匀后进样，测得氯霉素峰面积是20，对硝基苯酚峰面积是120，已知氯霉素相对于对硝基苯酚的相对校