E08203104水产品中的组胺的检测.doc

实验项目编号：实验四（请写到第四个实验的位置，将第三个实验位置留出） 实验名称：水产品中的组胺的检测 实验学时：4 实验日期：先不写 实验地点：先不写 实验四 水产品中的组胺的检测 实验目的 l．了解偶氮试剂比色法测定水产品中组胺的方法原理。 2．掌握正戊醇提取组胺的操作技术。 3．学会用偶氮试剂比色法检测水产品中组胺的检测技术。 二、实验原理 水产品中的组胺用正戊醇提取，遇偶氮试剂显橙色，与标准系列比较定量。组胺是水产品中游离的组氨酸在组氨酸脱羧酶作用下，发生脱羧反应而形成的一种胺类物质。脱羧酶来自一些含有组氨酸脱羧酶的微生物，如某些肠杆菌、弧菌属等，其中最主要的是摩根变形杆菌和组胺无色杆菌。当水产品受到这些细菌污染后，会产生大量的组胺，从而反映出水产品受微生物污染的程度。 三、仪器与试剂 (1) 正戊醇；三氯乙酸溶液(100gL)；碳酸钠溶液(50gL)；氢氧化钠溶液(250gL)；盐酸(1+11)。 (2) 偶氮试剂 甲液：称取0.5g对硝基苯胺，加mL盐酸溶液溶解后，再加水稀释至20mL，置冰箱中。 乙液：亚硝酸钠溶液(5gL)，临用现配。 甲液5mL、乙液40mL混合后立即使用。 (3) 磷酸组胺标准贮备液准确称取0.2767g于(士5)干燥2h的磷酸组胺，溶于水，移100mL容量瓶中，加水至刻度。此溶液每毫升相当于1.0mg组胺， (4) 磷酸组胺标准使用液 吸取.0mL磷酸组胺标准贮备液，置于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于20μg组胺。 四、实验步骤 1．样品处理 称取5.00～l0.00g切碎样品，置于具塞锥形瓶中，加入15～20mL三氯乙酸溶液，浸泡2～3h，过滤。吸取2.0mL滤液，置于分液漏斗中，加氢氧化钠溶液使呈碱性。每次加3mL正戊醇，振摇5min，提取三次。合并正戊醇提取液并稀释至10.0mL。吸取2.0mL正戊醇提取液于分液漏斗中，每次3mL盐酸(1+11)振摇提取三次，合并盐酸提取液并稀释至10.0mL。备用。 2．测定 吸取2.0mL盐酸提取液于10mL比色管中。另吸取0、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、l.0mL组胺标准使用液(相当于0、4μg、8μg、12μg、16μg、20μg组胺)，分别置于10m比色管中，加水至lmL，再各加lmL盐酸溶液。样品与标准管各加3mL碳酸钠溶液、3mL偶氮试剂，加水至刻度，混匀，放置10min后用lcm比色杯以零管为参比，于480nm波长处测吸光度，绘制标准曲线比较，或与标准系列目测比较。管号 0 1 2 3 4 5 样品管 组胺标准使用液/mL 0 0.40 0.60 0.80 1.0 2mL 提取液 纯水/mL 1.0 0.80 0.60 0.40 0.20 0 盐酸溶液/mL 样品管不加 碳酸钠溶液/mL 样品与标准管各加 偶氮试剂/mL 样品与标准管0，加水至刻度，混匀，放置10min 组胺含量/μg 0 8 12 16 20 吸光值（A） 五、结果计算 (1) 计算公式 m1 x= m2×(2/v1) ×(2/10) ×(2/10)×1000 式中，x为样品中组胺的含量，mg/100g； V1为加入三氯乙酸溶液的体积，mL； m1为测定时试样中组胺的含量，μg； m2为试样质量，g。 (2) 结果的表述报告算术平均值精确至小数点后一位。 六、注意事项 1本方法的最低检出浓度为5mg/100g，允许相对误差≤10％。 2用正戊醇提取三氯乙酸溶液中的组胺时，必须用氢氧化钠溶液调pH至碱性，以便于游离组胺的提取。 七、思考题 1. 影响组胺含量测定准确性的因素有哪些? 2. 组胺与偶氮试剂的反应中，酸碱度控制不当会给实验结果造成怎样的影响?