产柠檬酸黑曲霉高产菌株的筛选_李常健.pdf

第 30 卷 第 12 期 湖南科技学院学报 Vol.30 No.12 2009 年 12 月 Journal of Hunan University of Science and Engineering Dec.2009 产柠檬酸黑曲霉高产菌株的筛选 李常健，潘 宏 （湖南科技学院 生命科学与化学工程系，湖南 永州 425100） 摘 要：以从湖南科技学院周围菜园土壤中分离得到的黑曲霉作为出发菌株，并初步对其进行了形态鉴定。利用透明圈 法进行初步筛选，以产酸能力的强弱作为复筛指标，筛选到了一株高产柠檬酸的优势菌株。在复筛的过程中，采用单因子试 验和正交试验对黑曲霉的培养基的成分和浓度进行确定。 关键词：黑曲霉；筛选；产酸率 中图分类号：Q93 文献标识码：A 文章编号：1673-2219（2009）12-0026-04 柠檬酸又名枸橼酸，是目前以微生物发酵生产的重要有 1.2.3 黑曲霉的初筛 机酸之一。产柠檬酸的微生物包括真菌、细菌和酵母，黑曲 将分离纯化所得的黑曲霉（菌落丰厚边缘整齐、生长旺 霉是迄今为止产柠檬酸最佳的微生物之一。本次实验的目的 盛的单菌落）连续划线接种到初筛培养基平板上，在 35℃ 是从土壤中筛选柠檬酸的黑曲霉高产菌株，并对其培养基的 的恒温培养箱培养 3-4d 后，发现菌落周围有黄色的变色圈 配置及最佳产酸条件进行探索，为今后进一步完善和优化其 （溴甲酚绿指示剂遇酸会产生颜色反应）。快速测定菌落及 筛选工艺提供一定理论依据。 周围变色圈直径的大小，选择生长较快、变色圈与菌落直径 之比相对较大者作为初筛菌株。 1 材料与方法 1.2.4 黑曲霉的复筛 1.1 实验材料 将初筛到的黑曲霉（变色圈明显）配制成菌悬液接种到 1.1.1 出发菌种 查氏培养基中，发酵 3-5d ，用纸层析法测定柠檬酸的纯度（温 从湖南科技学院周围菜园土壤中分离获得。 度 24-26 ℃，上行 2-3h ，显色剂为 0.04%的溴甲酚蓝溶液， 1.1.2 培养基 点 样 10 微 升 ， 层 析 纸 （ 新 华 一 号 滤 纸 ）， 标 准 液 参见文献 1。 （0.2mol/LC H 0 和草酸），然后用 0.1429mol/L 的 NaOH 溶 6 8 7 1.2 实验方法 液滴定 10mL 的发酵液，记录各自消耗 NaOH 的 体积和计 1.2.1 黑曲霉筛选的流程 算产酸率。采用单因子法测定复筛培养基成分：用麸皮：甘 土壤配制成菌悬液 涂布分离 恒温培养 蔗渣、麦杆和玉米粉去替代原发酵液中的蔗糖，而其它成分 多次重复分离纯化的操作 （保证分离到的菌株是所需目的菌