含吡咯结构的二芳氨基吡啶类alk抑制剂的合成.docx

含吡咯结构的二芳氨基吡啶类alk抑制剂的合成 间谍活动激酶（alk）是胰岛素受体酪氨酸激酶家族的成员。 色瑞替尼是诺华(Novartis)公司研发的第二代2,4-二芳氨基嘧啶类ALK抑制剂，于2014年经FDA批准上市。结合文献报道的ceritinib与ALK蛋白(PDB ID code:4M KC)的共晶模型 1 氯吡啶2的合成 自行设计的目标化合物的合成路线见图2:以邻苯二胺(1)和2,4,5-三氯嘧啶(2)为起始原料，经N-烃化、N-酰化两步反应得到关键中间体4。以5-氟-2-硝基苯甲醚(5)和吡咯(6)为起始原料，经N-烃化、硝基还原反应得到中间体8。中间体4和8发生N-烃化反应得到目标化合物I 2 合成实验 化合物熔点采用北京泰克有限公司X-4数字显示熔点测定仪测定(温度未经校正); 2.1 -三氯吡啶2,4,5-三氯吡啶的合成 将17.7 g(0.16 mol)邻苯二胺(1)和30.0 g(0.16 mol)2,4,5-三氯嘧啶(2)溶于300 mL异丙醇(IPA)中，加入54 mL(0.33 mol)N,N-二异丙基乙基胺(DIPEA)，升温至80℃搅拌反应2 h。反应完毕，趁热抽滤，滤饼倒入0.1 mol·L 2.2 -二氯甲烷的合成 将20.0 g(79 mmol)中间体3和33.4 mL(0.24 mol)三乙胺溶于100 mL二氯甲烷中，冰水浴下缓慢滴加7 mL(94 mmol)特戊酰氯，室温反应2.5 h。反应完毕，减压蒸馏除去大部分溶剂，向残余物中加入200 mL水，搅拌0.5 h，抽滤，水洗滤饼，真空干燥滤饼，得到白色固体(4)22.3 g，收率为83.2%。ESI-MS m/z:339.1[M+H] 2.31 碳酸钾的制备 将20.0 g(0.12 mol)5-氟-2-硝基苯甲醚(5)、9 mL(0.14 mol)吡咯(6)和50.0 g(0.36 mol)碳酸钾溶于100 mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，升温至100℃反应8 h。反应完毕，冷却至室温，将反应液倒入500 mL水中，搅拌1 h。抽滤，用200 mL水洗涤，真空干燥滤饼，得到黄色固体(7)19.6 g，收率为75.5%。ESI-MS m/z:219.2[M+H] 2.42 混悬液中添加7.2%氧化应激 将15.7 g(0.28 mol)铁粉和3.0 mL(36 mmol)盐酸溶于200 mL体积分数90%的乙醇中，升温至70℃反应0.5 h。向上述混悬液中加入15.0 g(70 mmol)中间体7，升温至80℃反应4 h。反应完毕，垫硅藻土趁热抽滤，减压蒸馏除去大部分溶剂，向残余物中加入100 mL水，搅拌，用饱和碳酸氢钠水溶液调节pH值为8.0～9.0，乙酸乙酯萃取(100 mL×2)，合并有机层，搅拌，加入盐酸-二氧六环溶液(4 mol·L 2.5 中间体4和9.0g10. 基氨基)亚甲基]-1H-吡咯-1-基}-2-甲氧基苯基)氨基]嘧啶-4-基}氨基)苯基]特戊酰胺(I 将10.1 g(30 mmol)中间体4和9.0 g(40 mmol)中间体8溶于100 mL异丙醇中，升温至80℃反应24 h。反应完毕，趁热抽滤，将滤饼倒入100 mL水中，搅拌，用饱和碳酸氢钠水溶液调节p H值为8.0～9.0，二氯甲烷萃取(100 mL×2)，合并有机层，减压蒸馏除去溶剂，所得固体经硅胶柱色谱(二氯甲烷-甲醇，体积比500∶1)分离制得目标化合物I 2.6 甲醛溶液配制 将0.2 mmol不同的脂肪胺和质量分数为37%的甲醛水溶液0.02 g(0.3 mmol)溶于5 mL冰醋酸中，搅拌0.5 h。将化合物I 合成的16个目标化合物的收率、熔点及波谱数据见表1。 3 活性成分的初步探索 以色瑞替尼(ceritinib)为阳性对照药，采用M TT法 表2数据显示，大部分化合物对ALK高表达细胞Karpas299和H2228有较好的抑制作用，而对A549及MCF-7细胞无明显活性，表明化合物对ALK阳性细胞具有较强的细胞选择性。化合物I 基于细胞水平的活性结果，采用均相时间分辨荧光技术(HTRF)酶活性评价法 根据化合物的体外抗肿瘤细胞增殖活性，对其构效关系进行初步探讨:1)在嘧啶4位芳氨基上引入特戊酰胺基片段能够保持或提高目标化合物的活性。2)分子末端的水溶性基团(R)为保持活性的必需基团，以吡咯基取代的化合物I