08-09植物组织培养实验教案.doc

PAGE  PAGE 12 实习二 营养培养基配制 一、培养基母液配制 为了减少工作量，减少多次称量所造成的误差，一般将常用药品配成比所需浓度高10—100倍的母液，现以MS 培养基为例，预先配制，四组不同母液，说明母液的配制方法。 MS培养基母液配制（单位：毫克　mg）注意： 1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。 2．微量元素母液按要求浓缩100倍的数值称取，分别将各种化合物称量除铁盐（FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O）作为一组单独配制外，其余化合物分别置于烧杯内加少量蒸馏水溶解后，混合定容在1000ml容量瓶中，置小口瓶中保存，贴上标签。 3．铁盐配制将FeSO4·7H2O和Na2-EDTA.2H2O分别溶于450ml蒸馏水中加热，不断搅拌，溶解后两液混合，调PH 5.5加水定容至1000ml，置于小口瓶中，贴上标签。 4．有机物母液配制，按母液要求浓缩50倍，除蔗糖按3%单独临时称量外，其余分别称量后，溶解，定容在500ml容量瓶中，置于小口瓶中保存，贴上标签。 5．母液最好在2~4℃的冰箱中贮存，特别是有机类物质，贮存时间不宜过长，无机盐母液最好在一个月内用完，如发现有霉菌和沉淀产生，就不能再使用。 6.制备母液和营养培养基时，所用蒸馏水或无离子水必须符合标准要求，化学药品必须是高纯度的（分析纯）。 7.称量药物采用高灵敏度的天平，每种药品专用一药匙。 母液 成　分 规定量浓缩 倍数 称取量母液 体积配制1升培养基吸取量定容编号种类  = 1 \* ROMAN I大量元素KNO319001019000 1000 100NH4NO316501016500MgSO4·7H2O370103700KH2PO4170101700CaCl2·2H2O440104400  = 2 \* ROMAN II 微量元素MnSO4·4H2O22.31002230 100 10ZnSO4·7H2O8.6100860H3BO36.2100620KI0.8310083Na2MoO4·7H2O0.2510025CuSO4.5H2O40.0251002.5CoCL2.6H2O0.0251002.5铁盐Na2-EDTA37.31003730100010FeSO4.4H2O27.81002780  = 3 \* ROMAN III 有机物甘氨酸2.050100 500 10盐酸吡哆醇0.55025盐酸硫铵素0.1505烟酸0.55025肌酸100505000二、养培养基配制程序 (一)母液吸取量的计算 配制培养基的升数 公式1：母液吸取量= 母液体积×—————————— 母液浓缩倍数 培养基要求的含量 公式2：母液吸取量= ———————————（各种生长调节剂） 母液每CC的含量 （二） 各种母液按顺序编号排列 A.大量元素；B.CaCl2.2H2O；C.微量元素；D.铁盐； E.有机物； F．生长素萘乙酸（NAA）：配制0.5mg/ml的NAA称取50mg ， NAA用少量95% 酒精溶解后加蒸馏水定容至1000ml；G.细胞分裂素、激动素（KT）配制0.5mg/ml的KT 称50mgKT用少量1N HCL溶解后,加蒸馏水定容至100ml。 (三)　配制培养基 1.称取5-7g琼脂，30g蔗糖加入300ml蒸馏水，加热溶解直至完全溶解为止. 2.各种母液的吸取 用50ml量筒量取大量元素母液（A）和CaCl2·2H2O母液（B）各100ml 分别用10ml移液管或吸管吸取微量元素（C），铁盐（D）母液各10ml 用10ml移液管或吸管