SN_T 4849.6-2017出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法 实时荧光PCR法 第6部分：猕猴桃.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4849.6-—2017出口食品及饮料中常见小浆果成分的实时荧光PCR法检测方法第 6 部分：猕猴桃Identification of the ingredients of common small berry fruitsin food and juice for export-Real-time PCR method--Part 6 : Kiwi2018-03-01实施2017-07-21 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局50927刮涂屋 SN/T 4849.6—2017前 言SN/T4849《出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法实时荧光PCR法》系列标准共分为6部分：第1部分：蓝莓；一第2部分：树莓；一第3部分：黑加仑；一第4部分：桑葚；一第5部分：蔓越莓和蓝莓；第 6部分：猕猴桃。本部分为SN/T4849的第6部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院。本部分主要起草人：陈颖、邓婷婷、黄文胜、吴亚君、杨艳歌、刘鸣畅、韩建勋、张九凯、王斌。1 SN/T 4849.6—2017出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法实时荧光 PCR 法第6部分：猕猴桃1范围SN/T4849的本部分规定了出口食品及饮料中猕猴桃成分的检测方法实时荧光PCR法。本部分适用于鲜果、冷冻果、蜜饯、鲜榨果汁、果肉型果汁、果干、果酱等以猕猴桃为原辅料的初加工食品及饮料中猕猴桃成分的定性检测（清汁及果酒除外）。本部分所规定方法的最低检出限（LOD)为1%（体积比）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法食品分子生物学检测GB/T27403—2008实验室质量控制规范3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1小浆果 small berry fruits浆果是指由个子房或联合其他花器发育成的柔软多汁的肉质单果，由一个或几个心皮形成。小浆果则泛指果实较小、多汁的一类浆果。3.1.2猕猴桃kiwi藤黄目猕猴桃科猕猴桃属植物果实，果形般为椭圆状，内部为绿色（或红色)果肉和一排黑色或者红色的种子。拉丁文名：Actinidia Chinensis。3.22缩略语下列缩略语适用于本文件。DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid)。PCR:聚合酶链式反应(polymerase chain reaction)。Ct值：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。dNTP:脱氧核苷酸三磷酸（deoxyribonuleoside triphosphate）。dATP:脱氧腺苷三磷酸(deoxyadenosine triphosphate)。dCTP:脱氧胞苷三磷酸（deoxycytidine triphosphate）。1 SN/T 4849.6—2017dGTP:脱氧鸟苷三磷酸（deoxyguanosine triphosphate)。dTTP:脱氧胸苷三磷酸(deoxythymidine triphosphate)。UNG:尿嘧啶 N-糖基化酶（uracil N-glycosylase)。CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithylammonium bromide）Tris:三羟甲基氨基甲烷LTris(Hydroxymethyl)aminomethane]。EDTA:乙二胺四乙酸(Ethylene diaminetetraacetic acid)。Taq:水生栖热菌(Thermus aquaticus）。OD:光度密度(optical density)。4　方法提要果实样品直接粉碎离心，果汁样品直接离心，提取沉淀DNA，果干、果酱、蜜钱先用蒸馏水清洗再提取 DNA。以猕猴桃果实为阳性对照,以其他水果 DNA 为阴性对照，无菌水作为空白对照。使用特异性引物探针进行实时荧光PCR扩增，通过实时荧光信号曲线判定是否存在猕猴桃成分。5试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。5.1检测用引物和探针：猕猴桃成分扩增引物和探针、内参照（显花植物NADH基因）引物和探针详见表 1。猕猴桃引物扩增的靶标序列参见附录 A。表 1 猕猴桃序列引物探针扩增片物种名称引物/探针序列（5→3）靶基因段长度F:GCT