SN_T 3589.7-2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法 第7部分：鳕鱼成分检测 实时荧光PCR法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3589.7--2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法第7部分：鳕鱼成分检测实时荧光PCR法Identification of fish species in export food--Part 7 : Detection of cod fish ingredient---Real-time PCR method2013-11-06 发布2014-06-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局利涂层脊首片 SN/T 3589.7---2013前言SN/T3589《出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法》共分为7部分：第1部分：石斑鱼成分检测实时荧光PCR法；一第2部分：安康鱼成分检测　实时荧光PCR法；-第3部分：鲑鱼成分检测　实时荧光PCR法；一第4部分：河豚鱼成分检测实时荧光PCR法；一—第5部分：黄鱼成分检测实时荧光PCR法；第6部分：金枪鱼成分检测实时荧光PCR法；第7部分：鳕鱼成分检测　实时荧光PCR法本部分为SN/T3589的第7部分。本部分按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本部分主要起草人：张舒亚、高宏伟、李富威、杨捷琳、张瑞灏、蒋羽、顾顺樟、陈颖、吴亚君、韩建勋。 SN/T 3589.7---2013出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法第7部分：鳕鱼成分检测实时荧光 PCR 法范围SN/T3589的本部分规定了出口食品中鳕鱼成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品中太平洋鳕（Gadus macrocephalus）、大西洋鳕鱼（Gadus morhua）、黑线鳕(Melanogrammus aeglefinus）、青绿（Pollachius virens）、蓝鳕（Midromesistius poutassou）、青鳕（Pollachius pollachius）、狭鳕（Theragra chalcogramma）、南非无须鳕（Merluccius capensis）、阿根廷无须鳕（Merluccius hubbsi）、北太平洋无须鳕（Merluccius prodluctus）等鳕鱼及其制品鉴伪的定性检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子物学检测3　术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1鳕鱼cod鳕形目（Order Gadiformes)鱼类主要指鳕科（Gadidae）和无须鳕科（Merlucclidae）的鱼类。3.2实时荧光 PCRreal-time PCR在PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。3.3Ct 值 cycle threshold value每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。缩略语4DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid)dNTP:脱氧核苷酸三磷酸(deoxyribonucleoside triphosphate)CTAB：十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrithylammonium bromide)Tris:三(羟甲基)氨基甲烷［tris(hydroxymethyl)aminomethane11 SN/T 3589.7—2013EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid)Taq:水生栖热菌(Thermus aquaticu)OD：光密度值（optical density)5方法提要样品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板，采用鳕鱼的16SrRNA基因特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象，判断样品中是否存在鳕鱼成分。6仪器设备6.1实时荧光 PCR仪。6.2核酸蛋白分析仪或紫外分光光度计。6.3恒温水浴锅。6.4 离心机。6.5微量移液器。6.6研钵及粉碎装置。6.7涡旋振荡器。6.8pH计。6.9天平:感量0.01 g。1试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。试验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。7.1检测用引物和探针：a）正向引物:5’-GGGAAGAGCTTTGAGTAGAGGTGA-3;b）反向引物:5′-AAGGGCTGAACTCCTATTCATTTC-3’；探针:5-FAM-CGAGCCCAGTTATAGC