银杏外果皮有机酸类化合物的提取分离与分析.ppt

* * 银杏外果皮有机酸类化合物的提取分离与鉴定 目 录 1、研究的目的及意义 2、银杏外种皮有机酸类化合物的粗提 3、总银杏酸的纯化 4、银杏酸的定性与定量检测 一、研究目的及意义 银杏酸是银杏中除银杏内酯和银杏黄酮之外的另一类活性成分。银杏酸具有抑菌、消炎、抗过敏、抗肿瘤、杀虫作用,在药物化妆品及生物农药方面有较大的开发应用价值。银杏酸类可看作水杨酸分子在苯环C6位上连有较长侧链取代基的系列化合物,该长链分烷基链和烯基链,由13-17个碳原子组成。银杏酸主要存在于银杏外种皮中,我国银杏资源丰富,银杏外种皮通常被作为废弃物,造成了资源的巨大浪费。本论文针对银杏外种皮中银杏酸的提取、纯化、分离及其定性定量分析展开研究。 二、银杏外种皮有机酸类化合物的提取 有机溶剂萃取利用化合物在两种互不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另外一种溶剂中。经过反复多次萃取，将绝大部分的化合物提取出来。可以通过银杏酸类化合物极性不同采用不同极性的有机溶剂进行萃取，达到分离银杏酸的目的。常用的提取溶剂主要有石油醚甲醇、乙醇、正己烷、环己烷、氯仿等。由于银杏酸的极性较弱，采用非极性溶剂直接提取，可以减少黄酮和多糖等水溶性和醇溶性杂质在粗提物中的含量。 影响银杏酸浸提效果的因素很多，如溶剂用量、提取温度和提取时间。在单因子试验的基础上，采用正交法设计试验确定最佳浸提条件，因素水平见表2-1。 水平 A 温度（℃） B 时间（h） C 溶剂：皮量（V:W） 1 60 1 5:1 2 70 1.5 10:1 3 80 2 15:1 表2.1 正交试验因素水平表 水平 A 温度（℃） B 时间（h） C 溶剂：皮量（V:W） D 银杏酸的总含量% 1 1 1 1 1 9.26 2 1 2 2 2 9.81 3 1 3 3 3 9.37 4 2 1 2 2 9.38 5 2 2 3 3 10.14 6 2 3 1 1 8.79 7 3 1 3 3 9.43 8 3 2 1 1 9.26 9 3 3 2 2 9.25 K1 9.48 9.37 9.10 ? ? K2 9.44 9.74 9.48 ? ? K3 9.31 9.14 9.65 ? ? R 0.17 0.60 0.55 ? ? 表2.2 正交试验结果 将试验结果进行方差分析可知，3个因子对提取效果的影响与单因子试验结果基本相同。各因子对浸提效果影响的大小顺序为：提取时间（因子B） 溶剂用量（因子C）提取温度(A)。通过对图表分析，银杏酸的最佳提取条件为A2B2C3，即以石油醚为提取溶剂，采用1:15（W/V）的料液比，在70 ℃下，回流提取一次,提取时间为1.5 h,此条件下银杏酸的提取率最高。 在此条件下，对提取次数进行了探讨，提取次数对提取率的影响如下图 三、硅胶柱层析法对总银杏酸粗提物的纯化 硅胶柱（27mm×495mm），石油醚进行湿法装柱，并用洗脱剂排尽柱中的石油醚，湿法上样，洗脱速率为5 mL/min，每50 ml收集一次。洗脱液采用紫外全波长扫描法和液相色谱相相结合的方法进行确定。 洗脱剂 洗脱液 检测结果 石油醚：乙醚：乙酸（95:5:1） 第一部分洗脱液 没有银杏酸 石油醚：乙醚：乙酸（90:10:1） 第二部分洗脱液 大部分为银杏酸，并含有少量杂质。 第三部分洗脱液 没有银杏酸 石油醚：乙醚：乙酸（70:30:1） 第四部分洗脱液 没有银杏酸 表2.3 流动相的探讨 第一部分洗脱液 第二部分洗脱液 第三部分洗脱液 第四部分洗脱液 　 液相分析条件：流动相：80%—95%的甲醇梯度洗脱，另加0.1%的磷酸，流速：1.2 mL/min,柱温：30 ℃，检测波长240 nm和310 nm。 图2.1 银杏酸的标准高效液相色谱图 图2.2 第二部分的液相色谱图 图2.3 第一、三、四部分的液相色谱图 　三、银杏酸的定性和定量分析 四、银杏酸的定性和定量分析 1、银杏酸的HPLC分析 液相色谱分析条件：C18（200×4.6 mm）,柱温30 ℃，流动相为甲醇—0.01 mol/L的磷酸溶液（90:10），流速1.2 mL/min，检测波长310 nm。 图3.1 纯化产物的液相色谱 图3.2 粗提物的液相色谱 一般来讲，化合物在反相高效液相色谱中的出峰顺序与化合物本身的极性有关，极性大的化合物先出峰。银杏酸系列化合物的极性差异与其侧链的长短及侧链中双键的数目有关。如图3.2所示，六个化合物的出峰顺序是C13:0、C15:1、C17:2、C15:0、顺式C17:l、反式C17:l，可以看出，不饱和程度高的银杏酸(C15:1、C17:2)极性比相应的相同碳原子不饱和程度低的