人类胚胎干细胞向造血细胞的自发分化.pdf

·602· Med South 南方医科大学学报(J Univ) 2009；29(4) 人类胚胎干细胞向造血细胞的自发分化 王建，林戈，赵惠萍，卢光绣(中南大学生殖与干细胞工程研究所，人类干细胞国家工程研究中心，湖南长沙 410078) 摘要：目的研究人类胚胎干细胞自发向造血分化过程中造血1：细胞和成熟IffL细胞标志出现时间，这将为胚胎干细胞定 向诱导分化提供依据。方法将我所建苞的人类胚胎下细胞系(chESC3)白发分化形成拟胚体，RT．PCR方法检测不问时 间点造血相关基阗KDR、BmiI、Scl、gata2等的表达、流式细胞术检测6、8、10、12d造血干细胞标志CD34表达，并通过 8d 造血集落培养方法检测这些时间点造血集落形成能力，最后将拟胚体制备石蜡切片，免疫细胞化学检测10、12、15、1 d开始表达，并且维持高表达到12d。流式 的延长，在第和6天开始上调表达；造血1二细胞标志性基因Sel，gata2在6—8 细胞术检测不『司时间点hEBs中CD34阳性细胞数，发现其随时间的延长有增多的趋势，6、8、10、12d分别为(1．4± O．4)％、(3．4+1．3)％、(5．5+2．2)％、(5．1％士1．7)％；6、8、10、12d的拟胚体细胞进行集落培养检测形成的集落数在每105个拟 疫细胞化学法对10、12、15、18d拟胚体进行切片染色．发现存这4d中u『以明显观察到CD45阳性细胞的出现．并随时 经历r3个阶段：hESCs向胚层特异性细胞分化(前6-8d)；造血干祖细胞扩增期(第8—12天)；成熟血细胞大量出现期 (15d以后)。 关键词：造血干细胞：胚胎干细胞：分化 中图分类号：Q813文献标识码：A 文章编号：1673-4254(2009)04．0602．04 differentiationofhuman stemcellsinto cells Spontaneous embryonic hematopoietic WANG Jian，LINGe，ZHAOHui—ping，LUGuang-xiu Instituteof andStemCell ofCentralSouth StemCell ResearchCenterof Reproductive Engineering University,HumanEngineering China，Changsha410078，China Tocharacterizethetimecourse differentiationofinvitroculturedhuman stem Abstract：Objeetive ofspontaneous embryonic into cellsto evidenceforinductionof commitmentof cells(hESCs)hematopoieticprovideexperimental hematopoietic hESCs．MethodsInhuman from differentiation hESCeelllinewe embryoidbodies(hEBs)derivedspontaneous ofchESC3，a establis