肿瘤标志物检测和临床技术应用.ppt

前 言 　肿瘤是严重威胁人类健康的高发病率和高死亡率性疾病,大量研究和防治资料证实,早期诊断和早期治疗是防治肿瘤与降低死亡率的最有效办法?因此,肿瘤标志物的出现使人们对肿瘤的早期诊断寄予了极大的希望?由于肿瘤早期不伴转移,容易切除,可为患者赢得较多的生存机会,因此,早期发现?早期治疗可降低癌症死亡率,改善预后,提高生活质量?肿瘤标志物的检测对肿瘤辅助诊断及判断肿瘤预后?转归?评价疗效,都具有重要的意义?随着肿瘤基础研究的深入和临床治疗实践经验的积累,肿瘤标志物的检测得到了从事肿瘤基础和临床工作者的重视,已成为临床检测的重要项目之一? 肿瘤早期诊断早期根治的重要性 肿瘤是人体组织细胞由于内在和外界致病因素长时间的作用, 使细胞遗传物质DNA产生突变,细胞发生异常增生和功能失调造成的一种疾病。 世界卫生组织指出:若能早期诊断并及时治疗,90-95%的肿瘤是可以治愈。 如胃癌早期行根治术，5年生存率达90%，如侵及肌层则下降为50-70%，如侵入浆膜则仅为8-17%。 肿瘤的早期诊断虽有可能(因为肿瘤潜伏期可长达数月至数年)，但实际上十分困难，因为目前大多数的诊断技术都不适合肿瘤的早期诊断 本次会议交流内容 一、肿瘤标志物（TM）的定义与分类 二、TM的实验室检测方法 三、 TM的实验室检测基本原则 四、 TM实验室检测的影响因素 五、 TM的临床应用 六、 TM的联合应用 七、 TM测定的合理应用及注意事项 八、 TM的临床价值评价(备） 九、常用TM的临床意义(备） 一、肿瘤标志物的定义 肿瘤标志物（TM）是指在恶性肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌的或是由机体对肿瘤反应而异常产生和/或升高的反映肿瘤存在和生长的一类物质，它包括蛋白质、激素、酶（同工酶）、多胺及癌基因产物等。 TM存在于肿瘤患者的血液、体液、细胞或组织中，可用生物化学、免疫学及分子生物学等方法测定，且对肿瘤的辅助诊断、鉴别诊断、观察疗效、监测复发以及预后评价具有一定的价值。 1978年Herberman在NCI人类肿瘤免疫诊断大会上提出 1979年英国第七届肿瘤发生生物学和医学会议上被确认使用 细胞TM 位于细胞中的与肿瘤相关的物质或抗原，如激素受体、生长因子受体、白血病表型、分子基因等。 体液TM 肿瘤细胞分泌或脱落于血液、尿液或其他体液中、或是宿主对体内新生物反应而产生并进入体液的物质。 （二）、TM的分类 　TM主要分为两类：肿瘤组织产生的和肿瘤与宿主相互作用而产生的。 　　1)肿瘤组织产生 包括：分化抗原；胚胎抗原(AFP,CEA)；同工酶(NSE)；激素(HCG)组织特异性抗原(PSA,free PSA)；粘蛋白、糖蛋白、糖脂(CA125)癌基因及其产物；多胺类 等 　　2)肿瘤与宿主相互作用后产生 包括：血清铁蛋白；免疫复合物；急性时相蛋白　同工酶；白细胞介素受体；肿瘤坏死因子 等 3）不进入体液的标志物 二、临床上诊断肿瘤的方法和实验室检验方法: 物理学检查 用生物物理方法，如X线，CT和超声等检查，只有当肿瘤大小至少到1～2cm时才能发现，而此时肿瘤细胞数已达109以上。 组织细胞学检查 需做病理切片检测，一般在出现临床症状或高度可疑时适用，或在手术后发现。 生物化学检查 ALP、GGT、ALT 、AFU等 标记免疫学分析 灵敏度和特异性均较高，广泛应用于实验室检测，已被广泛应用的检测方法主要有：放射免疫分析（RIA）、酶免疫分析（EIA）、时间分辨荧光免疫分析（TFIA）和化学发光免疫分析（CLIA） 时间分辨荧光、基因芯片、表面增强的激光解析/ 电离化飞行时间质谱 等。 1、 放射免疫分析 ? 放射免疫分析自20世纪60年代问世以来，在生物医学各个领域得到了广泛的应用。20世纪90年代，RIA技术研究的主要进展是试管固相法。有学者将试管固相法称之为第四代RIA。固相RIA和免疫放射测量法（IRMA）的灵敏度、特异性、稳定性及测量范围均优于液相竞争法；尤其是不需要使用离心机进行分离，简化了操作步骤，提高了检测的精密度。活化试管RIA和IRMA技术系共价键结合，包被均一，稳定性好，实现了分析技术一步法，易于实现自动化分析。 该技术反应条件要求一般 ,但所用试 剂具有放射性 ,对人体有一定的危害 ,实验人员应加强防护 。 2、酶免疫分析? 由于RIA和IRMA有着自身固有的、难以克服的缺陷，Engvall和Vanweemen各自领导的研究小组分别以酶代替同位素，于1971年创立了酶免疫分析技术(EIA)。因其标记物制备简单，有效期长，对环境无污染等特点，EIA技术得到了迅速的普及和发展。20世纪90年代后期，在EIA中引进了放大系统，主要是生物素—亲和素系统的应用，