微量铁的测定p.ppt

* 　　 微量铁的测定 可见分光光度法 OBJECTIVE 掌握分光光度法的基本原理 2 学会光度法测定物质的含量 3 学习可见分光光度计的使用方法 PRINCIPLE 有色物质对光的吸收具有选择性，溶液的不同颜色是由于溶液中有色物质选择地吸收各种颜色的光引起的。有色溶液的颜色实质上是它所选择吸收的光的互补色. 当一束白光通过铁黄色络离子溶液时，兰色光大部分被吸收，其它色光透过. Beer-Lamber:当一束单色光通过有色溶液时部分吸收，部分透过，有色物质对光的吸收度(吸光度A)与有色物质的组成量度(C)和液层厚度(L)的乘积成正比. A = KLC =- lgT = - lg I I0 A: 吸光度 (absorbance) K: 吸光系数 (absorptivity) L: 液层厚度 C: 溶液组成量度 T: 透光率(transmitance) I0 I L C Beer-Lamber ：物质对单色光吸收的强弱与吸光物质浓度和厚度关系的定律 Beer： 吸光与浓度的关系 Lamber： 吸光与厚度间的关系 I I0 透光率(transmitance, T) A=-lgT 吸光度 (absorbance) E 吸光系数 (absorptivity) 吸收光谱(吸收曲线) 标准曲线 A = KLC A = K’C 可见分光光度法: 是对于能吸收可见光的有色溶液的测定 方法，对于许多不吸收可见光的无色物 质可以用显色反应使之变成有色物质。 1 显色反应及其条件 因素：试剂与溶剂、酸碱度、时间、温度及其它 操作时，必须在平行原则的条件下进行 2 测定方法：标准曲线法 (空白溶液作对照)：消除溶剂或其它物质对入射光吸收等因素 溶剂空白：显色剂及制备试液的其它试剂均无色；可用溶剂作空白 溶液 试剂空白：显色剂有色；按显色反应相同条件下加入各种试剂和溶 剂(不加试样溶液) 试样空白：试样基体有色，显色剂无色；不加显色剂但按显色反应 相同条件进行操作 显色剂：磺基水杨酸 pH 1.8~2.5 淡紫色 4.0~8.0 橙红色 8.0~11.5 黄色 12 沉淀 吸收波长：380~480nm范围内，选择最大吸收波长λmax(425nm) 实验条件： PROCEDURE 1　系列标准溶液和待测溶液的配制 编号 　空白 1 2 3 4 5 　 6 未知 标准溶液(ml) 　 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 1.00(待测液) 10%磺基水杨酸(ml) 5.00 HOAc-NaOAc缓冲液(ml) 10 蒸馏水 稀释至50.00ml 2　标准曲线的制作 波长425nm下，以空白溶液为参比溶液，分别由稀至浓 测定一系列标准溶液的吸光度．以Fe3+含量为横坐标， 吸光度为纵坐标绘制标准曲线． 编号 　 空白 1 2 3 4 5 　 6 Fe3+含量(mg/ml)　 吸光度(A) 波 长