全自动生化分析仪测定全血糖化血红蛋白一种改进型方法的研究.doc

全自动生化分析仪测定全血糖化血红蛋白一种改进型方法的研究 　　摘要：目的 提高全自动生化分析仪检测HbA1C的准确性，减少手工样品预处理所造成的误差。方法 采用英国朗道免疫比浊法糖化血红蛋白试剂及配套的质控品、校准品，应用日立7600全自动生化分析仪检测朗道质控品及本院内分泌科收集的100份EDTA-K2抗凝新鲜全血HbA1C，其中朗道质控品采用原始方法和改良方法重复测定20次。结果 同一浓度朗道质控品分别用两种方法在同一仪器上平行测定20次，得到批内变异CV值。两法精密度均符合实验室要求（5%），但改良法（批内变异CV值均小于3.2%）的重复性较原始方法（批内变异CV值均小于4.5%）好。而且改良法测定值更接近目标均值。两法结果比较分析：两法测定结果差异比较有统计学意义（P0.001），但相关性较好（r=0.992）。结论 两种方法测定糖化血红蛋白的结果具有很好的相关性，但改良方法的准确性及重复性均较高，更加有助于临床医生做出正确的判断，值得推荐。 　　关键词：全自动生化分析仪；全血糖化血红蛋白；改进型方法 　　糖化血红蛋白是目前国际上公认的监测糖尿病患者血糖控制的金标准[1]，是糖尿病微血管、大血管并发症的重要评估指标[2-3]，这是糖尿病控制与并发症研究（DCCT）和英国前瞻性糖尿病研究（UKPDS）在经过十几年的大规模临床研究后得出的结论报告，2009年美国糖尿病协会将其列入糖尿病首选的诊断标准[4]。糖化血红蛋白中80%以上的组分是HbA1C，HbA1C是葡萄糖与血红蛋白β链N末端其缬氨酸稳定的结合产物，以HbA1C的结果来报告糖化血红蛋白在业界已达成共识，对HbA1C认知程度的增加，也就是对糖尿病微血管、大血管并发症认知程度的增加[5]，在2008年颁布的糖尿病治疗指南中推荐控制目标为，HbA1C7.0%，更理想的控制目标为HbA1C6.5%，但如果HbA1C6.0%则有低血糖症的风险，尤其对于1型糖尿病患者而言[6]。因此，准确测定HbA1C是糖尿病适宜的血糖控制前提。为了提高全自动生化分析仪检测HbA1C的准确性，减少手工样品预处理所造成的误差，本文对全自动生化分析仪检测HbA1C的方法进行了改进。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 　　1.1.1试剂与仪器 试剂为英国朗道免疫比浊法糖化血红蛋白试剂及配套的质控品、校准品；仪器为日立7600全自动生化分析仪。 　　1.1.2样本来源 朗道质控品及本院内分泌科收集的100份乙二胺四乙酸二钾抗凝新鲜全血。 　　1.2方法 　　1.2.1原始测定方法 试剂盒提供的原始参数为先手工将全血样本做1：41（10μl全血+400μl变性剂）预处理，然后上机。参数为HbA1C：2点终点法，主波长700nm， 预处理好的样本4μl，R1100μl，R2100μl，反应时间10min，读点18、25。Hb：1点法，主波长600nm，处理好的样本15μl，R1200μl，反应时间10min，读点17。 　　1.2.2改良测定方法 应用7600仪器的样本稀释功能，将手工预处理改成用事先混匀好的全血样本直接上机测定，将仪器参数设定为仪器先将样本做1：41（10μl全血+400μl变性剂）预处理，然后取预处理好的样本4μl，将测定HbA1C的两个试剂由R1和R2变为R2和R3，将测定Hb的一个试剂变为R2，其余参数保持不变。 　　1.2.3将朗道质控品高低值分别用原始方法和改良方法重复测定20次，计算均值、标准差、变异系数。内分泌科收集的100份EDTA-K2抗凝新鲜全血，每份样本均分别用原始方法和改良方法测定，计算均值、标准差、相关系数及t、P值。 　　1.2.4统计学处理 所有数据处理均在SPSS13.0软件包上进行。两者差异比较用配对t检验，相关性比较采用线性相关回归分析。 　　2 结果 　　2.1两种方法重复性评价 同一浓度朗道质控品分别用两种方法在同一仪器上平行测定20次，得到批内变异CV值。两法精密度均符合实验室要求（5%），但改良法（批内变异CV值均小于3.2%）的重复性较原始方法（批内变异CV值均小于4.5%）好。而且改良法测定值更接近目标均值，见表1。 　　2.2两种方法测定100份样本结果的统计分析 其中X是参比方法：试剂厂家参数测定结果；Y是待评方法：改良方法参数测定结果。两法结果比较分析：两法测定结果差异比较有统计学意义（P0.001），但相关性较好（r=0.992）。见表2。 　　3 讨论 　　本研究对两种方法测定不同浓度的糖化血红蛋白的结果进行比较，结果表明两种方法的精密度均符合实验室要求（CV5%）。由此可以说明两种方法对于不同浓度的糖化血红蛋白的测定具有良好的稳定性和重复性。但改良法（批内变异CV值均小于3.2