不同细胞系表达的抗EGFR单抗糖基化结构对比分析.PDF

1018 生 物 工 程 学 报 王冲 等/不同细胞系表达的抗EGFR 单抗糖基化结构对比分析 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn June 25, 2017, 33(6): 1018−1027 DOI: 10.13345/j.cjb.170074 ©2017 Chin J Biotech, All rights reserved ·生物技术与方法· EGFR 1 2 王冲 ，郭怀祖 1 201203 2 201203 , . EGFR . , 2017, 33(6): 1018–1027. Wang C, Guo HZ. Characterization of N-glycosylation in an anti-EGFR monoclonal antibody produced by different expression systems. Chin J Biotech, 2017, 33(6): 1018–1027. 摘 要: 真核表达系统造就了单克隆抗体药物的广泛异质性，这些异质性通常是由翻译后修饰引起，而糖基 化修饰则是关键的翻译后修饰，其对治疗性蛋白的安全性和有效性有着深远的影响，为探索细胞表达系统的改 变对单抗糖基化所带来的影响，应用液相色谱- 电喷雾离子化四极杆飞行时间质谱技术 (LC-ESI-Q-Tof) ，通过 交替高低碰撞能量扫描、源内诱导解离及二级质谱的方法从释放的寡聚糖水平研究聚糖结构，对比分析由两种 不同细胞系制备的抗表皮生长因子受体 (EGFR) 单抗，然后结合外切糖苷酶逐级消化的方法对两种蛋白的糖 链结构作进一步确证分析。分析结果表明，在Fc 区域的糖基化修饰，两种表达系统表达的该抗体未发生明显 的改变，而在Fab 区域，由小鼠骨髓瘤细胞SP2/0 制备的抗EGFR 单抗的聚糖结构中含有大量α半乳糖 (α-Gal) ， 且末端唾液酸形式主要是 N-羟乙基神经氨酸 (NGNA) ，具有极高的免疫原性风险。而通过中国仓鼠卵巢细胞 CHO 表达系统制备的抗 EGFR 单抗 Fab 区域聚糖结构中不含有α-Gal ，且末端唾液酸形式主要是N 乙酰神经 氨酸 (NANA) ，免疫原性风险极大降低。本研究在一定程度上可以预测由CHO 表达系统制备的抗EGFR 单抗 具备较好的临床耐受性，超敏反应发生风险低，CHO 细胞可以作为该抗体改良型生物类似药 (Biobetter) 的优 选表达系统。 : 细胞表达系统，糖基化，α半乳糖，免疫原性 Received: February 26, 2017; Accepted: April 6, 2017 Supported by: RD Public Service Platform (No. 16DZ2292900), Industry School Research Medicine (No. 16DZ1910400), Scientific Instrument Field (No. 16142201700), Enterprise International Cooperation Projects (No. 16430730400), Biological Medicine Field of Shanghai Science and Technology Support Program (Nos. 16431904100, 1