【2017年整理】植物实验连续石蜡切片番红-固绿对染色制片幼嫩六出花花药与子房永久封片.doc

实验名称：连续石蜡切片番红-固绿对染色制片幼嫩六出花花药与子房永久封片 实验目的： 1.通过实验掌握石蜡制片法的基本操作过程 2通过实验认识植物花药发育的一般过程与子房胚囊发育的一般过程 实验原理： 石蜡切片发实在研究植物细胞的形态结构等方面常用的制片方法。它可以是植物材料切成薄的切片，又可以切成连续的薄片，切片经染色后，观察效果甚好。石蜡切片一般要经过取材，固定，洗涤，脱水，透明，透蜡，包埋，切片，染色，丰藏等过程，因此耗时较长，需4天时间。 本实验采用番红-固绿对染色制片，是植物制片上最普通的一种二重染色法，其染色过程简单并能清晰地显示出细胞结构。番红为碱性染料，能使细胞核及木质化的细胞壁染成红色；固绿为酸性染料，能使细胞质及纤维素的细胞壁染成绿色。 实验仪器：切片机，电热恒温箱，摊片机，解剖刀，镊子，单面刀片，台木，毛笔，蜡铲，酒精灯，包埋机，染色缸，玻片机，温度计，冰箱 实验试剂：FAA固定液，1%番红，1%固绿，各级酒精，二甲苯，石蜡，粘片剂，树胶 实验材料：六出花花药与子房 试验流程：取材——固定——洗涤——脱水——透明——透蜡——包埋——切片——贴片——染色——封藏——风干——镜检——照相 实验步骤： 取材：取大小六出花，将花被，花丝，花柄剥去，只留下花药与子房，并投入到小户口瓶中。 固定：将FAA固定液倒入盛有材料的玻管中，固定时间5-7天 保存：用60%酒精保存 分别经各级酒精70% 80% 90% 100% 100%脱水（纯酒精两次）每次0.5小时 等量纯酒精及二甲苯0.5小时，二甲苯0.5小时（中间换一次） 等量二甲苯与纯石蜡中0.5小时后，换纯石蜡过夜，第二天一早换新蜡（此步老师代做） 在包埋机上将花药与子房根据切片时的方向，置于包埋盒，放入液体石蜡，注意调整材料方向，其后可冷冻后取出蜡块 在修改后，粘合，并置切片机，对花药进行横切，对子房进行纵切制片，将切好的蜡带，按不超玻片2/3的大小切成；放于摊片机，待蜡带充分展开后，即捞片到涂有粘片剂的玻片上。 使玻片上的粘片剂充分风干后，即可进行染色，先将切片在二甲苯中脱蜡，30分钟 等量纯酒精而二甲苯5分钟 经纯酒精，95% 90% 80% 70% 50% 30%各级酒精各5分钟，蒸馏水2-5分钟 1%番红水溶液染色1小时 用水吸取多余的染液 30% 50% 70% 80% 90% 95%各级脱水3-5分钟 1%的固绿，染色10-30s 95%的酒精漂洗 纯酒精脱水5分钟 等量纯酒精二甲苯混合液5分钟，纯二甲苯5分钟 通风橱内用中性树胶封藏 自然风干玻片后镜检观察切片，选择出切得较正较好的花药发育阶段与子房胚囊发育阶段 显微检查切片，并各自选择结构完好，材料清晰的切片 显微摄相 实验结果： 1.六出花子房横切4× 10× 40× 六出花花药纵切4× 10× 40×