实验3永久制片的制作.doc

实验一 永久制片的制作 ——取材、固定 一 实验原理 用于制片的动、植物材料应该选择新鲜的，用陈腐的材料制片，往往不能反映材料的真实情况。固定是将新鲜材料投入某类化学药液中，借助化学药品的作用使细胞组织的形态保存下来不使其改变形态和变质的过程。 二 实验目的 通过教学要求学生掌握永久制片过程中的取材、切割、杀死（固定）等操作的原理、技术和注意事项；掌握固定液的配制和应用。 三 实验仪器、材料和试剂 双面刀片、镊子； 植物的茎、根、树皮等材料； FAA固定液、4%戊二醛固定液、卡诺氏固定液。 四 实验过程 （一）取材的方法 取材应根据需要，用锋利的刀片从所需部位上切取一小块放在固定液中固定。动物组织的切片，厚度不超过3mm，体积不大于1.5cm×1.5cm×0.5cm。植物组织应根据实际情况，细的根、茎和窄的叶片，可以切取3-5mm长一小段；粗的根、茎和宽的叶片，也可以取一部分进行固定。 材料的选择和切取部位也很重要，例如，制作植物细胞有丝分裂的切片，一般多选择根尖。因为这个部位的细胞分裂得快，制作动物染色体的切片，可用动物的睾丸等。 （二）不同材料的取材(以植物材料为例) 根：不能用力将根拔出，以免皮层与中柱分离和皮层留在地下，一定要先把泥土翻开挖出根，洗净泥土，用湿纸包好拿回来。 茎：带叶的茎可插在花瓶内养几天，也可切成很长的几段用湿纸包起，注意不要折断或压碎。 叶：用刀片切下叶柄，不能摘下或压挤叶柄。如不能立刻固定，可将叶片夹在潮湿的纸袋内，带回来的叶子如有枯萎现象，须先使之温润，恢复原状后再固定。 花和果实：将整个花、花序及果摘下，包在湿纸内，然后贮藏在密闭的容器内，放阴凉处。 苔藓植物：连底土一起采，然后放在潮湿的容器内，使它变膨胀，并使底土达到饱和状态，把它放在解剖镜下将所需的部分解剖出来固定。 藻类：将藻类带水一起采集，放在阴凉处。 肉质菌类：大的肉质菌类包在蜡纸内，小的菌类包在潮湿的纸内，再包上蜡纸。 病理材料：不能损伤寄生的组织，并且，取材时应包括周围的健康组织，有时还应采集正常的组织，以便作比较观察。 （三）选材的注意事项： 1、取材部位健全、有代表性； 2、采集时尽可能不损伤所需要的部分； 3、材料应立即杀死和固定； 4、已压制的干标本可放在水中浸软后再做切片，但只能用于观察维管束排列等较大的构造。 5、采标本前应配好相应的固定液，取材后立即投入； 6、一般用新的单面刀片切取材料，刀利、动作快，轻夹轻放 （四）材料的分割： 切取材料一般用新的单面刀片，切割时切勿拉锯式来回切取，须轻夹轻放。尽可能将材料切小切薄些，利于固定液的透入（固定液穿过外表具角质和木栓质部分慢而穿过切割表面快）。 植物材料的切取应先确定切取哪种切面，在切割时保持它原有的位置关系。一般有两种切面： 横切面：与器官的长轴垂直的切面。 纵切面：与器官的长轴平行的切面。又分为径向切面（通过半径的纵切面）和弦切面（不通过半径的纵切面）两种。 叶片分割：叶窄，不超过5mm，沿中脉横切，每片长约3—5mm；宽叶类，可分割为许多小片（沿主脉和各级侧脉），选择其中含有主脉和侧脉的固定。 草本植物根、茎、叶柄或其它园筒形器官分割：如果直径小于2mm，且表面高度角质化的，切成长约2mm的小段，如果表面非角质化，则可切成10mm长的小段；直径为5mm长；直径为1cm时，厚度切成2—5mm；直径较大的茎，切成5mm厚，且可分割一半或1/4，或为楔形。 木质小枝的直径在5mm以内时：可切成15mm长。较粗的枝条，其割取长度宜较短，因其表面已木栓化，能阻止固定液的穿透。将小枝切成段时不用修枝剪或小刀，最好用锐利的刀片切取。 （五）几种固定液的配制方法： 福尔马林—醋酸—酒精液（FAA） 固定柔弱的材料，如苔藓植物，以50%酒精为好，固定坚硬的材料以70%酒精为好。固定木材可略减冰醋酸，略增福尔马林；易于收宿的材料可稍增冰醋酸的用量；如固定植物胚胎，配方改为： 50%酒精 89ml 冰醋酸 6ml 福尔马林 5ml 卡诺氏固定液的配制： 100%酒精 3份 冰乙酸 1份 4%戊二醛的磷酸缓冲液固定液： 甲 3.5820g Na2HPO4?12H2O溶于蒸馏水中定容到50ml; 乙 1.5605gNaH2PO4?2H2O溶于蒸馏水中定容到50ml; 甲36ml + 乙14ml + 25%戊二醛24ml + 26 ml蒸馏水即成。 （六）固定操作：统一用青霉素小瓶固定和脱水操作。 五 作业 1 简述材料固定的原理。 2 材料脱水前的洗涤的目的是什么？选用洗涤液的依据是什么？ 3 简述材料包埋的操作过程及注意事项。 1