细胞培养-绪论.ppt

细胞培养 映生命的各种活动规律，以及部分地提供在机体 中发生的各种信息。 细胞培养是一门技术，包含有诸多方面的知识，涉及细胞生物学、生物化学、分子生物学、动物学与植物学、病原学、遗传学、肿瘤学、生物工程学甚至光学、物理学等学科，因此学习细胞培养应有一定的其他学科的知识，操作时刻不忘“无菌”概念。 体外培养(in vitro culture)：是将活体结构成分(如活体组织、活体细胞或活体器官等)甚或活的个体从体内或其寄生体内取出，模拟体内的生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件下使之存活和生长发育的方法。 按照体外培养的结构成分，可将体外培养人为分为： 组织培养(tissue culture) 细胞培养(cell culture) 器官培养(organ culture) 二、体外培养技术的发展历史 19世纪后叶实验胚胎学的兴起拉开了体外培养技术的序幕，一些著名实验如下： ●1859年，法国解剖学家Vulpain最早尝试将蛙胚尾部组织切下，放到普通水内进行“培养”，结果观察到了生长和分化现象。 ●1885年，德国人Roux用温热的生理盐水在体外使鸡胚髓板组织存活了数天，被认为是体外培养的萌芽实验，他首次提出组织培养这一概念。 ●1887年，Arnold将赤杨髓质小片在蛙的体液中浸过，然后将木片分别种植到蛙的皮下或腹腔内，木片被白细胞浸润后，于种植后不同时间将木片取出并置于温盐水中，观察到有白细胞从木片迁移到盐水中，且能短期存活。 　　　　● 1910年，A Carrel在没有抗生素的情况下，仅靠小心细致的无菌操作，连续培养鸡胚心脏植块长达数年之久。Carrel对体外培养的贡献： ◆将无菌操作观念引入体外培养过程中。 ◆将培养组织包埋技术、营养供应以及继续培养(也称传代或继代培养)等许多重要的培养条件和方法引入盖玻片悬滴培养系统，从而完善了Harrison的方法。 ◆发现鸡胚浸液能明显地促进多种细胞的体外生长。 ◆设计卡氏培养瓶减少了污染，扩大了细胞生存空间。 1910年，美国医生MT Burrows对悬滴培养法的改进: ① 用血浆凝块替代蛙淋巴凝块包埋要培养的组织，延长了组织在体外存活的时间。 ②与Carrel合作，致力于发展哺乳动物组织的培养，证明体外培养细胞的寿命可以因传代而延长。 ③胚胎浸液与血浆混合使用，培养物可以活的更好。 通过Carrel等学者的工作，使得体外连续营养供应和传代成为可能。 现在一般认为体外培养技术是从Harrison和Carrel真正开始的。 ● 1925年，Maximov对悬滴培养法作了改进，创造了“双盖玻片法”，可以更好地防止污染，也更适用于神经组织的培养。 ● 两位美国科学家W.H.Lewis和M.R.Lewis最先试用已知成分的合成培养基取代不能准确确定其成分的天然培养基，由于他们和其它许多科学家在此后30多年的努力，最终发展出许多合成培养基。 ● 剑桥大学Strangeways实验室的Honor Fell完善了组织和器官，乃至整个胚胎的体外培养方法(表玻皿器官培养法) 。借此保持它们正常的组织学结构，并防止从外植物新长出的细胞生长紊乱。Fell及其同事使用此技术培养骨和关节组织，为我们提供了大量有关这些组织发育的知识。 ● 细胞培养技术更加广泛地用于生物学和医学研究(如分子遗传学、分子生物学和细胞工程等学科均与细胞培养技术密切相关)如： 　◆ 应用理化因素诱发出遗传缺陷细胞株。 　◆ 利用细胞技术，用杂交瘤细胞制备McAb 　◆ 用细胞培养检测环境中可疑致癌物，癌基因转染和细胞转化等。 　◆ 基因工程的生产手段，用于生产多种生物制品。 7. cell line (细胞系)：原代培养物经首次传代成功后即成为细胞系。 8. Clone (克隆) ：单个细胞通过有丝分裂形 成的细胞群体，他们的遗传特性相同。 9. Confluence (汇合) ：指在细胞培养瓶中培 养的细胞彼此汇合形成单层，注意与细胞融合的 区别。 10. Contact inhibition(接触抑制)：当一个贴壁生长的体外正常细胞生长至与另一个细胞相互接触时，便停止了分裂增殖，相互虽然紧密接触，但不形成交叉重叠生长，也不再进入S期。 11. In