验证报告1-畜禽肉中食源性兴奋剂和孕激素的测定 液相色谱-串联质谱法.docx
2.110.5%乙酸乙腈溶液：取5mL冰乙酸加入乙腈，并用乙腈定容于1000mL,混匀即可2.120.1%甲酸-5mmol/L乙酸铵水溶液：称取0.385g乙酸铵用水溶解，加入1.0mL甲酸
用水定容至1000mL
2.13复溶液：取0.1%甲酸-5mmol/L乙酸铵水溶液(4.12)90mL,加入10mL甲醇混匀。
2.14标准物质：44种被测化合物(纯度≥98%)、11种内标物具体信息见见附录A。
2.15标准储备液的配制：准确称取标准品(4.14)适量(相当于活性成分10mg),用甲
醇溶解并定容于10mL,配置成浓度为1.0mg/mL的标准储备液。在-20℃冷冻避光储存。2.16混合标准储备液：按照附录B依据化合物的类别将被测物分成7组，用甲醇配置成7
个混合标准储备液。所有标准溶液均在-20℃冷冻避光储存。
2.17内标混合标准中间液：取组7内标混合标准储备液适量，用甲醇配置成100-400ng/mL
的内标混合中间液，见附录B。
2.18外标混合标准中间液：临用前分别取上述1-6组混合储备液1mL,用甲醇定容于10mL
容量瓶，配置成外标混合中间液，浓度范围时100-400ng/mL,见附录B。
2.19系列标准工作液的配制：移取一定量外标混合中间液用基质空白提取液逐级稀释，并
向其中添加等量的内标混合中间液。
2.20微孔滤膜：有机系，0.22μm
3仪器和设备
3.1超高效液相色谱-四级杆串联质谱仪：配电喷雾离子源(ESI);
3.2高速冷冻离心机：8000r/min
3.3氮气吹干仪；
3.4超声波清洗器
3.5振荡器；
3.6分析天平：感量0.01g和0.00001g。
4试样制备和保存
肉类样品各约500g,放入组织捣碎机均质，充分混匀，均分成2份，分别装入清洁
容器内，并标明标记。试样于-20℃以下条件下保存。
5测定步骤
5.1样品的处理
5.1.1提取
准确称取粉碎均质后的猪肉样品5.0g(精确至0.01g)于50mL螺盖离心管中，加入
40μL混合内标中间液(2.16),加入5mL水，涡旋10s后，准确加入20mL含0.5%乙酸乙腈溶液(2.11),振荡提取15min,加入1.0g氯化钠和4.0g无水硫酸镁，快速混匀，
继续振荡10min,8000r/min离心5min。
5.1.2净化
移取上清液10mL于另一事先装入净化剂(PSA165mg、Cig165mg、中性氧化铝165
mg、无水硫酸镁900mg)的螺盖离心管中，振荡10min,8000r/min离心5min。准确
移取上清液5mL,置于氮气吹于仪上45℃吹干，加入1.0mL复溶液(2.13),涡旋复溶
用0.22μm微孔滤膜过滤，待上机测定。
5.1.3基质空白提取液的制备
称取不含被测物的阴性肉样品5.0g(精确至0.01g),不加内标，按照5.1.1和5.1.2
的方法进行前处理，得到空白基质提取液，用于配制标准工作曲线。
5.2空白试验
不称取试样，按5.1.2和5.1.3的步骤做空白实验。
a)
仪器
条件
1液相色谱条件
色谱柱：WatersAcquityBEHC18反相液相色谱柱(2.1mm×10mm,1.7μm)或同等
柱；柱温：30℃;进样量：5μL;流动相：A为含0.1%甲酸-5mmol/L乙酸铵水溶液，B
为甲醇。梯度洗脱条件见表1。
表1HPLC梯度洗脱条件
时间(min)A(%)B(%)流速(mL/min)
551070
5
5
10
70
80
100
100
5
5
0
0.51.06.08.09.0
10.0
10.1
12.0
95
95
90
30
20
0
0
95
95
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
0.3
2质谱条件
a)电离源：电喷雾正离子模式(ESI+);
b)检测方式：多重反应监测(MRM)
c)毛细管电压：0.5kV
d)锥孔电压：30V:
e)脱溶剂气流速度：650L/h;
f)脱溶剂气温度：450℃;
g)锥孔气流速：150L/h
表2被测物和内标的质谱参数
序号目标化合物
(min)保留时间
(min)
(m/z)母离子
(m/z)
子离子
(m/z)
碰撞能
(V)
碎裂电压
(V)
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
克伦特罗
妥布特罗
班布特罗
克伦丙罗
喷布特罗
克伦塞罗
马布特罗
溴布特罗
西马特罗
氯丙那林
奥西那林
沙丁胺醇
齐帕特罗
莱克多巴胺
沙美特罗
4.56
4.97
5.12
2.83
7.31
3.8