常见食品过敏原可视芯片检测方法（征求意见稿）.doc

××/T ××××—×××× PAGE II PAGE 1 发布中 华 人 民 共 和 国国家质量监督检验检疫总局 ××××-××-××实施 发布 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局 ××××-××-××实施 ××××-××-××发布 常见食品过敏原成分检测 可视薄膜生物传感器芯片方法 Detection of common allergens in food Optical thin-film biochips method （征求意见稿） SN/T ××××—×××× SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T××××—×××× PAGE II PAGE 2 SN/T ××××—×××× 前 言 本部分按照GN/T 1.1-2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出。 本部分由全国进出口食品检测标准化技术委员会（SAC/TC445）归口。 本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院等 本部分主要起草人：陈颖、黄文胜等 常见食品过敏原成分检测 可视薄膜生物传感器芯片方法 范围 本标准规定了常见食品过敏原成分的可视薄膜生物传感器法检测方法。 本标准适用于食品及其原料中常见过敏原成分的定性检测。 本标准所规定方法的最低检出限（LOD）为0.001 %（w/w）。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 术语、定义和缩略语 过敏原 allergen 又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原。 常见食品过敏原成分 common HYPERLINK /dict_result.aspx?searchword=%e8%87%b4%e6%95%8f%e5%8e%9ftjType=sentencestyle= allergens compound 过敏原又称致敏原或变态反应原，是指能够使人发生过敏的抗原。常见食品过敏原主要包括大豆、花生、小麦、坚果、牛奶、鱼、蛋类及甲壳纲动物，是8类重要过敏原。本标准中常见食品过敏原成分即指（大豆、花生、小麦、腰果、牛、鱼、鸡、虾）特异性DNA片段。 DNA：deoxyribonuleic acid，脱氧核糖核酸。 dNTP：deoxyribonucleoside triphosphate，脱氧核苷酸三磷酸。 CTAB：cetyltrithylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵。 Tris：tris（hydroxymethyl）aminomethane，三（羟甲基）氨基甲烷。 EDTA：ethylene diaminetetraacetic acid，乙二胺四乙酸。 Taq：Thermus aquaticu，水生栖热菌。 OD：optical density，光密度值。 PCR：polymerase chain reaction，聚合酶链反应。 SSC：salt-sodium citrate，柠檬酸钠缓冲液。 ATC：acid-treated casein，酸处理的酪蛋白。 TMB：tetramethylbenzidine，四甲基联苯胺。 HRP：horseradish Peroxidase，辣根过氧化酶。 防污染措施 环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T 27403-2008中附录D的规定。 方法提要 样品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板，采用大豆Lectin基因、小麦Gliadin基因、花生Ara h 3基因、腰果Ana o 3基因、鱼16S rRNA基因、虾16S rRNA基因、牛线粒体DNA基因和鸡线粒体DNA基因设计和筛选特异性的引物和探针，基于食品过敏原多重PCR检测方法，进行可视薄膜生物传感器芯片高通量检测常见8种食品过敏原的方法，根据芯片杂交信号，判断样品中是否存在常见食品过敏原成分。 可视薄膜生物传感器芯片检测方法 原理 将醛基标记探针固定在经过氨基化处理的芯片表面，然后使用生物素标记的引物进行PCR扩增，扩增产物与芯片上的探针进行特定的杂交反应；接着用辣根过氧化酶抗体 （HRP-antibody）处理，然后洗去未杂交的DNA链，加入四甲基联苯胺（TMB）处理，这时生物素标记的杂交DNA链在HRP-antibody和TMB的作用下产生沉淀而形成一层有机薄膜，这层薄膜改变了芯片表面的厚度导致反射光的颜色变化，从而产生肉眼可见的信号，而没有杂交成