食品中过敏原成分环介导等温扩增（LAMP）检测方法 第6部分：巴旦木（征求意见稿）.doc

××/T ××××—×××× PAGE II PAGE 1 发布中 华 人 民 共 和 国国家质量监督检验检疫总局 ××××-××-××实施 发布 中 华 人 民 共 和 国 国家质量监督检验检疫总局 ××××-××-××实施 ××××-××-××发布 食品中过敏原成分环介导等温扩增（LAMP） 检测方法 第6部分：巴旦木 Loop-mediated isothermal amplification detection method for allergen components in food Part 6:Almond （征求意见稿） SN/T ××××—×××× SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T××××—×××× PAGE II PAGE 4 SN/T ××××—×××× 前 言 SN/T ××××的总题目是食品中过敏原成分环介导等温扩增（LAMP）检测方法，由下列部分组成： 第1部分：开心果 第2部分：胡桃 第3部分：腰果 第4部分：榛子 第5部分：杏仁 第6部分：巴旦木 第7部分：巴西坚果 第8部分：澳洲坚果 第9部分：栗子 第10部分：羽扇豆 第11部分：葵花籽 第12部分：芝麻 第13部分：芥末 第14部分：花生 第15部分：大豆 第16部分：小麦 第17部分：大麦 第18部分：荞麦 第19部分：牛奶 第20部分：虾 第21部分：胡萝卜 第22部分：芹菜 本部分为SN/T ××××的第6部分。 本部分按照GN/T 1.1-2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出。 本部分由全国进出口食品检测标准化技术委员会（SAC/TC445）归口。 本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院等 本部分主要起草人：陈颖，黄文胜等 食品中过敏原成分环介导等温扩增（LAMP）检测方法 第6部分：巴旦木 范围 本标准规定了食品中过敏原巴旦木成分特异性的环介导等温扩增（LAMP）检测方法。 本标准适用于食品中过敏原巴旦木成分特异性的定性检测。 本方法的定性检测低限为0.5%（w/w）。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27403 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 术语、定义和缩略语 过敏原 allergen 又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原。 巴旦木 almond 又称扁桃仁（Prunus dulcis）即国内通常称之为美国大杏仁，是植物扁桃的种子，属于蔷薇科、李亚科、桃属、扁桃种。 dNTP（deoxyribonucleoside triphosphate）：脱氧核苷三磷酸 LAMP（loop-mediated isothermal amplification）：环介导等温扩增 Triton X-100：聚乙二醇辛基苯基醚 防污染措施 环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T 27403-2008中附录D的规定。 方法提要 样品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板，采用巴旦木过敏原基因序列（Pru du 2.02）特异性检测引物和探针进行LAMP扩增，通过颜色变化观察判定是否存在过敏原巴旦木成分。 LAMP检测方法 原理 根据巴旦木过敏原基因序列（Pru du 2.02）设计特异性内引物、外引物和环引物各一对，特异性识别靶序列上的八个独立区域，利用Bst DNA聚合酶启动循环链置换反应，在巴旦木过敏原基因序列（Pru du 2.02）特异靶序列启动互补链合成，在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物；从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg2+结合，产生副产物（焦磷酸镁）形成乳白色沉淀，加入显色液，即可通过颜色变化观察判定结果。显色液显色原理：SYBR Green I是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。在游离状态下，SYBR Green I发出微弱的荧光，但一旦与双链DNA结合后，荧光大大增强。因此，SYBR Green 的荧光信号强度与双链DNA的数量相关，可以根据荧光信号检测出LAMP反应体系存在的双链DNA数量。 仪器和设备 超纯水发生器（分子生物学级别）。 水浴锅或加热模板：65 ℃±1 ℃和80 ℃±1 ℃。 离心管：0.1 mL、1.5 mL。 计时器。 移液枪：量程0.5 μL~10 μL、量程10 μL~100 μL、量程100 μL~1000 μL。 试剂和材料 除另有规定外