免疫组化染色过程中存在的问题、原因分析与对策.pdf

免疫组化染色过程中存在的问题、原因分析及对策 良好的免疫组化染色切片是正确判断染色结果的基础和前提。 由于免疫组化染色过程中存在 很多步骤或环节， 每一个步骤或环节都可能影响到染色的最终结果， 因此， 要做好一张高质 量的免疫组化切片并不是一件非常容易的事。 需要病理技术员和病理医生密切配合、 相互协 调、共同努力才能保证做出合格的免疫组化切片。 虽然免疫组化染色可以存在各种各样的问 题，但从染色的结果看，一般可分为两类：无色片（即无阳性信号）和“杂音”染色片（有 阳性信号）。 一、 无色片 染色结束后， 切片中见不到任何阳性信号。 这是常规工作中比较常见的现象， 出现 这种现象，有两种可能： 1、真阴性结果：整个染色过程没有出现问题，组织或细胞确实不 表达与抗体相关的抗原。 2 、假阴性结果：即此阴性结果不是真实的反映。假阴性结果又可 分为两种情况：（ 1）、切片中根本就不包含所预期检查的组织或细胞。出现这种情况，要 麽是病理医生选择错了切片或抗体选错了， 要麽是技术员选错了蜡块。 获得正确的切片进行 染色是获得正确结果的前提。由此表明：制作出合格的免疫组化切片不仅仅是技术员的事， 病理医生也起着不可缺少的作用。（ 2 ）、染色过程中的某一或某些环节出了问题。比如， 组织未进行抗原修复， 有的组织必须经过抗原修复才能检测抗原表达； 或选用了只能用于冰 冻组织而不能用于石蜡包埋组织的抗体； 或一抗失效， 虽然抗体失效在理论上是一个逐渐的 过程，但偶尔也遇到突然失效的情况，抗体长期不用和 / 或已超过有效期是主要的原因。也 可见于染色过程中漏掉了某一环节，如忘记加二抗或三抗，或用了两次二抗而缺少了三抗， 或配制 DAB时少了过氧化氢。 为了避免这种简单的错误， 有一种简单的方法： 在三抗孵育结 束时， 将切片上的三抗甩在一张白纸上， 在将配制好的 DAB滴一滴在白纸的三抗上， 观察是 否出现棕色。 如果出现了， 证明三抗和 DAB的配制过程没有错误。 如果这种 DAB再滴到切片 上没有出现任何阳性信号， 问题一定是出在三抗以前。 如果纸上不出现棕色反应， 问题肯定 在三抗 DAB或 DAB的配制过程。这种简单方法能迅速的帮助我们查找出现问题可能的原因。 解决阴性染色的问题非常简单，就是设立“阳性对照”。如果阳性对照有了表达， 说明染色的全过程和所有试剂都没有问题。 如果此时测试片仍为阴性， 便是真实的阴性， 说 明组织或细胞没有相应的抗原表达。 反之， 如果阳性对照没有着色， 表明染色过程中某个或 某些步骤出了问题或试剂出了问题。 应一一寻找原因。 阳性对照包括两种， 一种称为“自身 对照”或“内部对照”， 这是指在测试的切片中本身就存在已知的抗原， 如正常淋巴结中存 在 T 和 B 细胞抗原， CD20或 CD3都应该有表达。自身对照是一种比较理想的对照，对照和 测试组织或细胞都在同一张切片中， 都处于相同的试验条件下， 结果更可靠也更具有可比性。 在选择自身对照片时最好选择既有病变组织同时又有正常组织的部分， 这样有利于对比。 另 一种称为“外部对照”， 有时在测试的切片中不存在已知的抗原， 如在胃的标本中怀疑是恶 性黑色素瘤，需要用