DNA的粗萃取.docx

DNA的粗萃取一溫30號羅瑞恩指導老師：許一懿老師實驗主題DNA的粗萃取實驗目的了解DNA粗萃取的基本原理學習簡單的DNA萃取方法實驗原理利用界面活性劑、離子正負吸附、酵素分解等特性，進而萃取DNA。實驗器材奇異果 1顆蒸餾水 125mL鮮榨鳳梨汁7.5mL5M食鹽水(NaCl)7.5mL洗碗精5mL95%酒精(先置冰箱內冰凍1天) 60mL量筒(10mL、50mL)各1支燒杯(200mL、100mL、50mL)各1個玻璃棒 1支玻璃吸管 1支5cm紗布 1片濾紙 2張水果刀 1 把果汁機1台實驗步驟萃取奇異果製備奇異果汁：奇異果削皮加100ml蒸餾水入果汁機中攪碎破壞果肉細胞：加2.5ml洗碗精，攪拌5分鐘使其混和均勻溶解染色體：加5M食鹽水5ml，攪拌5分鐘純化DNA：加5mL新鮮鳳梨汁，攪拌5分鐘收集DNA濾液：雙層紗布過濾混合液析出DNA：緩慢倒入30mL的95%冰酒精，溶液分層且在酒精與水的交界處出現白色雲狀物，即凝聚析出之DNA撈出雲狀物質至濾紙上完成二、萃取唾液DNA準備唾液：用10mL清水漱口1分鐘置被緩衝液：25mL蒸餾水、2.5mL洗碗精、2.5mL的5M食鹽水及2.5mL新鮮鳳梨汁，用玻棒輕輕攪拌1分鐘純化DNA：緩衝液加入漱口水中，攪拌2分鐘析出DNA：用吸管吸取95%冰酒精30mL沿著燒杯內壁，緩慢加入。溶液分層且在酒精與水的交界處出現白色雲狀物，撈出之即完成。實驗結果〔奇異果DNA〕〔唾液DNA〕實驗討論加入洗碗精的目的為何？洗碗精含界面活性劑(十二烷基硫酸鈉，SDS)，可破壞細胞膜、核膜。加入濃食鹽水的目的為何？使DNA成溶解狀態。（核酸的溶解度會隨食鹽濃度的變動而改變，在0.14M食鹽濃度溶解度低，在無鹽及高鹽濃度溶解度高）加入鳳梨汁的目的為何？鳳梨汁中含蛋白酶，可分解細胞質和染色體中的蛋白質。最後為何要加入95%冰酒精？酒精為有機溶劑可溶細胞中部分成分，如細胞膜、核膜，且與食鹽水分層，使不溶之DNA凝聚析出。所析出的雲狀物是一條DNA分子嗎？為什麼？不是。雲狀物為多條DNA和部分蛋白質纏繞而成。DNA直徑只有2nm，無法肉眼觀測。唾液中析出的DNA是否都是口腔黏膜細胞的DNA？為什麼？不是。可能含有食物殘渣和口腔細菌的DNA。參考文獻林英子、周書慧高中新超群選修生物下第303~305頁南一書局出版實驗討論QA 1. 加入洗碗精的目的為何？洗碗精含界面活性劑(十二烷基硫酸鈉，SDS)，可破壞細胞膜、核膜。 2. 加入濃食鹽水的目的為何？使DNA成溶解狀態。（核酸的溶解度會隨食鹽濃度的變動而改變，在0.14M食鹽濃度溶解度低，在無鹽及高鹽濃度溶解度高） 3. 加入鳳梨汁的目的為何？鳳梨汁中含蛋白酶，可分解細胞質和染色體中的蛋白質。 4. 最後為何要加入95%冰酒精？酒精為有機溶劑可溶細胞中部分成分，如細胞膜、核膜，且與食鹽水分層，使不溶之DNA凝聚析出。 5. 所析出的雲狀物是一條DNA分子嗎？為什麼？不是。雲狀物為多條DNA和部分蛋白質纏繞而成。DNA直徑只有2nm，無法肉眼觀測。 6. 唾液中析出的DNA是否都是口腔黏膜細胞的DNA？為什麼？不是。可能含有食物殘渣和口腔細菌的DNA。