柱前衍生高效液相色谱法测定食物中氨基酸含量.pdf

第 卷 分析化学 （ ） 研究简报 第 期 28 FENXI HUAXUE 9 年 月 2000 9 Chinese JournaI of AnaIyticaI Chemistry 1091 ~ 1095 柱前衍生高效液相色谱法测定食物中氨基酸含量 苗 虹! 杨 涛 霍君生 刘期成 卢承前 （中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所，北京 100050 ） 摘 要 采用柱前衍生高效液相色谱法，测定了食物中天冬氨酸、赖氨酸、亮氨酸等 种氨基酸含 16 量。衍生试剂为 氨基喹啉基 羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯（ ），流动相为磷酸盐缓冲溶液、乙腈、 6- -N- AOC 水，梯度洗脱。色谱柱为4 m 的Nova-Pak tm C18 柱，紫外检测。氨基酸浓度与峰面积呈良好的线性 ! 关系，相关系数均在0 .99 以上，回收率在88% ~ 110 % 之间，样品测定结果良好。 关键词 高效液相色谱法，梯度洗脱，柱前衍生，氨基酸 ! 引 言 〔〕 1 测定食物中氨基酸含量一般采用氨基酸分析仪，柱后衍生测定 ，但氨基酸分析仪价格昂 贵，分析时间长，且只能用于分析氨基酸，限制了氨基酸分析技术的广泛应用。70 年代以来， 〔 〕 柱前衍生高效液相色谱法开始应用于氨基酸的测定2 ~ 4 。液相色谱通用性强，检测灵敏度高， 可用于多种物质的分析。本文采用柱前衍生紫外检测的方法对几种食物中的16 种氨基酸进 行了测定。 实验部分 # ! 试剂 浓盐酸（优级纯）；苯酚（分析纯）；混合氨基酸标准液（ 公司），含 种蛋白水解氨基 Waters 17 酸：天冬氨酸（ ）、丝氨酸（ ）、谷氨酸（ ）、甘氨酸（ ）、组氨酸（ ）、精氨酸（ ）、苏氨 Asp Ser GIu GIy His Arg 酸（ ）、丙氨酸（ ）、脯氨酸（ ）、胱氨酸（ ）、酪氨酸（ ）、缬氨酸（ ）、蛋氨酸（ ）、赖 Thr AIa Pro Cys Tyr VaI Met 氨酸（ ）、异亮氨酸（ ）、亮氨酸（ ）、苯丙氨酸（ ）、除胱氨酸浓度为 外，其 Lys IIe Leu Phe 1.25 mmoI/ L 余 种氨基酸浓度各为 ；流动相 ，磷酸盐缓冲溶液（ 公司），按 用双蒸 16 2 .5 mmoI/ L A Waters 11 10 水稀释， 。亦可自行配制， 值应准确调节。配制方法： 三水醋酸钠， 三 pH 4 .95 pH 19 .0 g 1.72 g 乙胺溶于