伏马毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA方法的建立.pdf

V01．29 第29卷第2期 上海交通大学学报(农业科学版) No．2 2011年4月 OFSHANGHAI UNIVERSITY(AGRICULTU】iALSCIENCE) Apr．2011 J()URNAL JIA()T()NG 文章编号：1671—9964(2011)02—0069—06 伏马毒素B1单克隆抗体的制备及 间接竞争ELISA方法的建立 王雨晨，王 君，王元凯，严亚贤 (上海交通大学农业与生物学院，上海市兽医生物技术重点实验室，上海200240) 摘要：采用戊二醛法将半抗原伏马毒素Bt分别与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)和蛋白卵清白 法；KLH一飓作为免疫原免疫8周龄Balb／c小鼠，应用杂交瘤细胞融合技术制备单克隆抗体。经 三次亚克隆后，筛选出两株(6H3，6H11)能特异、稳定分泌抗FB：单克隆抗体的杂交瘤细胞株。选 择其中一株杂交瘤细胞通过体内诱生腹水的方法制备单克隆抗体，经检测表明单克隆抗体的亚型 为IgGl，轻链为K型。采用间接ELISA测得腹水纯化后效价达l：16000，抗体对伏马毒素的半数 阻断浓度(ICs。)为8．26ng／mL，对玉米赤霉烯酮、黄曲霉素Bl等结构类似物几乎不存在交叉反 应，与其他结构的氯丙嗪、链霉素等无交叉反应。利用获得的抗FB。单克隆抗体，建立了间接竞争 EUSA检测方法，检测灵敏度为O．44ng／mL，检测线性范围为0．93～73．06ng／mL，加标回收率 在线性范围内达到回收率可达78．4％～102％。 关键词：伏马毒素13,；半抗原；单克隆抗体；间接竞争ELISA 中图分类号：R379 文献标识码：A ofMonoclonalAntibodiesand ofanIndirect Preparation Development ELISAforFumonisindetection Competitive B1 WANG Ya-xian Yu—chert，WANGJun，WANGYuan-kai，YAN of of and LaboratoryVeterinaryBiotechnology，SchoolAgricultureBiology， (Key 200240，China) ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai of Abstract：Toestablishanindirect ELISAforFumonisinBl KLH-FBl competitive detection，coniugations were methodand were asthe and()VA—FBl using they employedcoatingantigen synthetizedglutaraldhyde