第四章性别控制技术讲课.ppt

改变冻精的解冻温度 在一定温度范围内，冷冻精液的解冻温度与精子的活力呈正相关。冻精解冻温度越高，精子复活越快，其活力也越强，消耗的能量快而多，故存活时间短。这样相应的缩短了Y精子的寿命，而延长了X精子的寿命，并增加了与卵子结合的机会，从而提高生母率。 流式细胞分离法发展前景 随着分离精子速度的提高，将来可以提供足够数量的用于人工授精的分离精子。例如，Beltsville公司利用新型的精子分离专用喷嘴来提高精子分离速度。在分离纯度为90％时，每小时可分离精子6百万个；如果纯度只是要求在75％～80％，那么速度可达到每小时2千万个。 另一方面，由于精子分离速度慢、成本高，人们一直探讨采用只需少量精子的输精技术。如手术输精（子宫内、输卵管内）、人工授精（子宫深部、子宫颈部）、体外受精（IVF）和胞质内精子注射（ICSI）。 调节授精环境的pH值 Ｙ精子对疲劳和酸的耐受力较差。 向前等(1996)用pH7.2的精液人工授精，结果产公犊72.3%，pH6.8产公犊39.1%。 段恩奎等(1991)在兔输精前经阴道输入不同浓度和构型精氨酸改变生殖道pH，结果后代雌性比率与浓度无关，而与pH有关，pH5.22雌兔率为39.1%，pH9.83雌兔率为61.90%,但与正常性比率差异不显著。 近几年来，有许多人做此方面的实验，有成功的报道，也有否定的观点。 控制授精时间 母牛排卵前输精易得雌性后代，近排卵时易得雄性后代，预测和实际符合率70%。 猪：对22窝母猪试验，排卵前授精得母仔55.6%，排卵后授精得公仔57.3%，（P0.05）。排卵前E2、LH比排卵后高2.3、6.3倍。 （二）胚胎的性别鉴定 性染色质鉴定法 染色体组型鉴定法 Ｘ连锁酶活力测定法 雄性特异抗原鉴定法 SRY-PCR鉴定法 LAMP 早期胚胎分割方法 毛细管吹吸法 2到8-细胞期卵裂球（有的是16细胞，应在致密化之前） 显微手术法 取囊胚的滋养层细胞或桑椹胚部分细胞 玻璃针、显微手术刀 显微操作仪简介 胚胎分割1 (模式:桑椹胚/囊胚) 胚胎分割2（2-到8-细胞期卵裂球） 注：两部片子中都不是太确切。 应用现代分子生物学技术对早期胚胎进行快速、准确的性别鉴定是可行的，但由于早期胚胎性别鉴定需从胚胎上取下少量细胞，对胚胎有一定损害，经冷冻-解冻处理后仅有少量胚胎存活，导致胚胎移植的成功率下降，这就制约了提供预知性别家畜胚胎的商业化进程。 1、性染色质鉴定法 是世界上第一种鉴定胚胎性别的方法。 Garner等人于1968年从兔胚胎中取出细胞并对其性染色质或染色质小体进行分析。 此法较复杂且对胚胎损伤大，成功率甚低，同时染色质小体在许多家畜胚胎细胞中很难发现和观察。对那些可辨认性染色质(暂时失活的X染色体)的少数胚胎来说，准确性很高。在实际生产中没有多大的价值。 2、染色体组型鉴定法 经典胚胎性别鉴定方法。 (1) 采集胚胎细胞样品；(2) 专门训练有素的技术人员；(3)费时。 2名有经验的技术人员约需5小时才能鉴定12-15枚胚胎。 难以应用于生产之中，只能主要用来验证其它性别鉴定方法的准确率。 操作过程:先取少量的胚胎细胞，在含有秋水仙素的培养液中培养，使细胞的有丝分裂停留在中期； 用低渗溶液使细胞膨胀，细胞膜破裂释放染色体，然后固定，用姬姆萨染色后在显微镜下观察。由于有丝分裂被阻滞在中期，故染色体缩短，形状规则，并有特异的带型。 使雌性不会因为拥有两个X染色体而产生两倍的基因产物，因此可以像雄性般只表现一个X染色体上的基因 新鲜血液中含有一种不耐热的成分，可辅助和补充特异性抗体，介导免疫溶菌、溶血作用，故称为补体。 自然选择进化的结果，一般孤雌生殖因为染色体组少一半，所以发育的个体会个体更小，寿命更短。但是节省了受精的时间，可以更多更快产生个体。蜜蜂是孤雌生殖，但是在整个世代中两性生殖和孤雌生殖同时进行的。因为它们中决定雌雄性别的是染色体组数。雄性都是非受精卵发育，雌性都是受精卵发育，要产生雌性必须进行交配。至于为什么单倍体产生的是雄蜂，可能是在蜜蜂中已经进化成蜂王产卵，发育不完全的雌蜂工作，雄蜂的作用只是交配。其中蜂王最大，虽然雄蜂个体比发育不完全的雌蜂大，但是它们没有蜂针，除了交配完全不进行工作，交配完成后很快死亡。所以可以推测：在蜜蜂进化过程中，因为资源的有限性，完全只起生殖的那个性别不用发育过于完善，这样反而会浪费资源。至于蚜虫、蝗虫的孤雌生殖，它们和蜜蜂有很大的不同。首先它们是孤雌生殖和两性生殖交替进行，比如春秋进行孤雌生殖，过冬进行两性生殖。然后它们的孤雌生殖雌性不用交配就可以大量产生小个体。这就有个非常大的好处：在气候适宜或者在新环境中需要扩大种群的时候，此时采用孤雌生殖，因为不需要两性受精的时间，就可以大量而又快速的繁殖