实验5多聚酶链式反应（pcr）.ppt

多聚酶链式反应（PCR） * 了解PCR的基本原理，掌握PCR的基本操作技术 一、实验目的 多聚酶链式反应是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的体外酶促合成反应。 由高温变性，低温退火和适温延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增 二、实验原理 1、变性（94℃） ： 使DNA双螺旋的氢键断裂，双链解离成单链DNA 2、退火（55℃）： 引物和其互补的模板在局部形成杂交链 3、延伸（72℃）： 通过Taq DNA聚合酶使4种单核苷酸从引物的3`端开始掺入，沿模板从5`向3`端方向延伸，合成与模板DNA的互补链。 二、实验原理 二、实验原理 以上3步为一个循环，每一循环的产物可作为下一个循环的模板，反复进行这一循环，可使两端引物限定范围内的DNA序列以指数形式扩增，循环的次数主要取决于模板的浓度，从理论上讲一个目的DNA分子经20次循环扩增后可达106。 双链DNA分子 双链断开 循环1 模板与引物结合 循环1 Taq Taq 循环1 Taq Taq 循环1 循环1 双链断开 循环2 模板与引物结合 循环2 Taq Taq Taq Taq 循环2 94℃变性 双链断开 循环3 循环3 Taq Taq Taq Taq Taq Taq Taq Taq 循环3 循环n 水稻总DNA PCR仪，台式离心机，电泳仪，电泳槽 2ml离心管架，移液枪，1. 5ml离心管，0.2ml离心管，枪头 dNTP，Taq酶，引物一对（RM1 F，RM1 R），10×PCR反应缓冲液，灭菌双蒸水， 三、实验材料、仪器及试剂 *