HPLC液相色谱仪实用技术.ppt

第四部分液相色谱仪实用技术--分析常见问题--仪器日常维护--仪器常见 故障 --色谱柱的使用与保养 分析常见问题 基线噪音 基线漂移 可能的原因： ﹠梯度洗脱 ﹠温度不稳定 (示差检测器） ﹠ 流动相中有污染物 ﹠柱中的流动相没有平衡 ﹠体系中有污染物流出 鬼 峰 峰 型 可能原因： ﹠柱中有死体积 ﹠过滤片部分堵塞 ﹠只有一个双峰——组分的共洗脱 ﹠样品与溶剂不匹配，溶剂与柱子不匹配 峰 型 可能的原因： 部分峰拖尾 ﹠二次保留效应——残留硅醇基的反应 ﹠小峰紧跟在大峰的后面流出 所有峰拖尾 ﹠额外的柱效应 ﹠柱坏/不适当的溶剂 ﹠柱头有污染 ﹠金属 ﹠不适当的样品量 峰 型 可能的原因 ﹠在大峰前，有小峰流出 ﹠柱死体积 ﹠样品溶剂不适当 ﹠过滤片部分堵塞 ﹠柱过载 峰 型 峰宽 * 在进样口到柱或柱到检测器之间，使用细的短的连接管 * 保证所有的管路接头都使用正确 * 用小体积检测池 * 减少进样量或降低样品浓度 柱外体积效应的影响 压力 I. 不进样时柱压连续升高 - 泵密封垫 - 流动相有颗粒 - 流动相溶解性 - 流动相的不稳定性 (聚合) - 形成柱死体积 (与使用条件有关) II. 进样时压力升高 - 样品有颗粒 样品在流动相中不溶 进样阀堵塞 - 样品组分与固定相不兼容 保留值漂移 I. 所有峰都向低保留值方向漂移（酸、碱、中性化合物） - 键合相流失 - 流动相不稳定 (可能性较小) - 溶剂输送系统 (流速变化) II.所有峰都向高保留值方向漂移 - 在水/有机溶剂的混合体系中，有机溶剂含量减少 - 柱改变 (可能性较小) - 溶剂输送系统 (流速变化) III.离子型化合物的色谱峰的保留值漂移 -流动相中挥发性组分损失 (离子强度, pH 漂移) - 柱改变 (键合相或污染) 保留值漂移 I. 与流动相有关的问题 - 使用新鲜的流动相 ?pH ?电导 ?色谱性能测试 II. 与色谱柱有关的问题 - 测试新柱 - 用标准的测试混合样测试新柱 - “清洗” 色谱柱后再测 - 考虑样品基质与使用条件对柱稳定性的影响 液相色谱仪的日常维护 储液罐 ? 使用HPLC试剂/溶剂 ? 含缓冲盐的流动相过0.22μm膜除去微粒物质 ? 更换流动相时,应彻底清洗，防止交叉污染 定期清洁储液器及附件，防止过滤头滋生细菌和微生物 输液泵 ? 流动相要过滤、脱气 ? 密封垫易损坏引起故障 输液泵 ? 每天实验结束一定要认真冲洗泵,注意防止堵塞 ﹠ 使用缓冲盐流动相时,更要小心。 ? 注意泵压力不要太高 ﹠要适当调整压力,一般压力上限在10～20MPa，下限为0.5MPa， ﹠防止因泵堵塞造成压力过高损坏柱塞杆或烧坏电机 ? 仪器长时间不用，每个泵通道和整个流路一定要用甲醇冲洗后保存，以免结晶或造成污染 ? ?? 分析样品前 用甲醇或乙腈冲洗流路约20分钟，平衡活化色谱柱，并赶走管路中的杂质和水分 ? ?若流动相仅为有机相与水相的混合物： 完成用有机溶剂冲洗后，按照分析样品的需要调节比例阀的比例后冲洗流路约20分钟后，待基线走平后即可进样。 ? 若流相相中含有缓冲盐溶液、有机/无机酸或其它电解质： 完成用有机溶剂冲洗后，用95%的去离子水冲洗流路约20分钟后， 再按照分析样品的需要调节比例阀的比例后冲洗流路约20分钟后，待基线走平后即可进样 ? ?? 分析样品后 ?? ? 若流动相为有机相与水相的混合物： 直接用甲醇或乙腈冲洗流路约30分钟后，待基线走平且无杂质峰出现后即停泵关机。 ? 若流相相中含有缓冲盐溶液、有机/无机酸或其它电解质： ? 先用95%的去离子水冲洗流路约40分钟 ? 再用50%的甲醇冲洗流路约30分钟后， ? 用甲醇或乙腈冲洗流路约30分钟后，待基线走平且无杂质峰出现后即停泵关机 检测器（流通池） ? 保持清洁，每天用后与色谱柱一起清洗 ? 不定期用强溶剂反向冲洗检测器 ? 使用脱过气的流动相，防止气泡滞留池内 ? 检测器灯有一定寿命，平衡和清洗色谱柱时不要开灯，检测中途不要随意开、关灯。 流动池的清洗方法（尽量少用） ?断开所有的管路，把针泵接到流动池的出口 ?用10～20ml纯水冲洗流动池（要确认所用溶剂已洗干净） ?用10～20ml的20%硝酸冲洗流动池（可以适当停留30min左右） ?用30～40ml左右纯水冲洗 ?用10～20ml左右甲醇冲洗 ?用干净的气体吹干 进样阀 ?清洗 停机前一定冲洗干净进样器内残留的样品或缓冲盐，防止样品和无机盐沉积造成进样阀转子面磨损或堵塞 ?不要