第三章 植物组培的培养基-黄秀梅.ppt

2、根据培养物的培养过程分为 初代培养基和继代培养基 含较低的铵 双子叶植物 尤其木本植物组培可选择 1943年由Ｗhite为培养番茄根尖而设计的。1963年又作了改良，称作Ｗhite改良培养基 。 特点：无机盐含量较低 适用：生根培养。 1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计 成分简单 KNO3 和 (NH4)2SO4含量高 广泛应用于小麦、水稻及其它植物的花药培养等 （一）无 机 盐 ▲ 碳水化合物　 选用种类：蔗糖（或葡萄糖、果糖）等 蔗糖浓度：2%～3%，胚培养为4%～15% 大生产时可用白糖 (四)培养体支持材料 1.琼脂 用量7－10g/L（0.7%-1%） 注意：1 若浓度过高，培养基就会变得很硬，营养物质就难于扩散到培养的组织中。 2 当进行营养需要研究时，应注意不要使用琼脂，因为市场供应所有琼脂含有杂质，特别是含有Ca,Mg和微量元素。 2.其它　 卡拉胶、玻璃纤维、滤纸桥、海绵等 (五)辅助性物质 1.抗生素 2.抗氧化物 3.活性炭 (二)母液配制要求： 1.母液浓缩倍数：10-100 ，大量元素10；微量元素、铁盐100；有机物50； 2.选用蒸馏水、重蒸馏水、分析纯或化学纯试剂 3.防止沉淀 4.激素母液浓度：1mg/ml,1次配成50或100 ml 5.激素溶解： IAA、IBA、GA、ZT先溶95%酒精再定容； NAA先溶于热水或95%酒精再加水； 2，4-D先溶于1M NaOH再加水； KT、BA先溶于1M HCl再加水。 第三节　培养基的选择 一、单因子试验 二、多因子试验 三、逐步增减法 四、广谱试验法 2种激素3种浓度的实验组合Ⅱ 广谱试验法 1 把培养基分为4个大类：无机盐、生长素、细胞分裂素和有机营养物质。 2 对每一类物质再选定3个浓度，既：低（L)、中（M）和高（H）、4类物质各3种浓度的各种不同组合构成了一项包括81个处理的试验。 3 在这81个处理中最好的一个用4个字母表示，例如：一个包含中等浓度无机盐、低浓度生长素、中等浓度细胞分类素和高浓度有机营养物质的处理表示为：MLMH。 4 达到这个阶段后，可以再试验不同类型的生长素和细胞分裂素，以找到它们的最好类型。因为有些试验系统对生长素和细胞分类素这两类生长物质的具体形式比较敏感。 NAA A：NAA 0mg/L，芽（少），根（无） B：NAA 0.1mg/L，芽（少），根（无），愈伤组织（少量） C：NAA 5.0mg/L，芽（少），根（多），愈伤组织（一定量） BA A：BA(0mg/L) ，芽（减少），根（增多）愈伤组织（一定量） B：BA(0.1mg/L)，芽（适量），根（适量）愈伤组织（一定量） 复习思考题： 初代培养，继代培养 初代培养基，继代培养基 MS培养基：琼脂和蔗糖的加入量一般为多少？ 培养基的成分包括哪几类？ 在组织培养中，生长素和细胞分裂素的作用是什么？ 复习思考题： 1.培养基的种类及特点有哪些？ 2.培养基的成分、作用及常用的剂量。 3.如何配制MS培养基？ 抗生素 1.常用种类：青霉素　链霉素　　　　　　　 庆大霉素等 2.用量：5%－20% 3.作用：防止由外植体内生菌造成的污染。 4 过滤灭菌 　　　　 ▲ 　　　　抗氧化物 　常用抗氧化剂及使用：　　　　　　　　　 半胱氨酸　VC（50－200mg/L液洗涤外植体伤口表面）。 活性炭 　1.作用：具吸附作用；茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓度0.1 －0.2%）；促进生根；防止组培苗玻璃化（浓度0.3%）。利于胚胎培养。　　　　　　　　　　　　　2.常用浓度：0.5－10g/L　　　　　　　　 3.活性炭的作用 ①对生长的抑制：其吸附了植物激素 ②对生长的刺激：其吸附了有抑制作用的物质 ▲ 第二节 培养基配制 一、母液配制与保存 二、培养基配制 (一)母液配制流程图 称 量 母液分装 确定培养基 溶 解 定 容 贴标签 保存于冰箱 一、母液配制 (以MS为例) 　 称量药品 天平预置 全显示 清 零 称