第三章植物组织与器官培养.ppt

胚培养技术 依据所剥离胚的发育时期不同： 培养类型 幼胚培养 (immature embryo) 成熟胚培养 (mature embryo) 子叶形成之前 子叶形成之后 胚培养技术 成熟胚培养 成熟胚珠 合点 珠心 珠被 珠柄 珠孔 胚囊 胚培养技术 成熟胚培养：指子叶期至发育成熟的胚培养。成熟胚是自养的，培养基需要简单。仅提供一定的温度、湿度就可以发芽生成植物体。如种子的发育。 培养过程： 种子——95%酒精消毒——选取完好种子——70%酒精浸数秒——0.1%升汞或10%次氯酸钠浸泡——无菌水冲洗——种子培养几天——剥离种胚——接种在培养基上。 成熟胚培养一般较易获得成功。 胚培养技术--成熟胚培养 牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖 胚培养技术--幼胚培养：是指处于原胚期、球形期、心形期、 鱼雷期的胚培养；幼胚完全是异养的，离体条件下培养要求培 养基成分复杂，培养不易成功。 幼胚培养的基本程序 取子房 常规表面消毒 解剖镜下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚 固体培养 黄瓜幼胚培养 影响幼胚培养成功的因素 培养基：无机盐、碳水化合物、激素等 环境条件(温度：多数为25-30℃，因植物种类有所差别。光照：一般认为黑暗或弱光条件较为合适。) 提高幼胚的成活率，可采用胚乳看护培养。 胚龄与胚性发育的关系 胚龄越小，离体培养越困难； 胚的发育分为自养期和异养期； 胚乳培养 胚乳培养（Endosperm culture）：是指将胚乳组织从母体上分离出来，通过离体培养，使其发育成完整植株的技术。 被子植物胚乳是由2个单倍的极核和1个单倍的精子结合而成的3倍体组织。由它可获得无子结实的3倍体植株，进而可将它加倍成6倍体植株。 1.胚乳离体培养的意义 胚乳培养再生植株证明了全能性理论； 研究胚和胚乳的关系及胚乳组织的功能； 再生植株多为三倍体，产生无籽果实； 可以从胚乳愈伤中分离和筛选各种类型的非整倍体植株。 胚乳细胞是研究淀粉、蛋白质和脂类天然产物代谢途径的理想系统。 2.胚乳培养技术 胚乳培养过程 含胚乳的果实或种子→表面消毒→无菌条件下胚乳的剥离→接种培养基培养 培养室温度25-27℃，黑暗或弱光下 影响植物胚乳培养的主要因素 基因型： 胚乳是一种独特的组织，在被子植物中它是双受精的产物，在倍性上属于三倍体，事实上我们培养胚乳的首要目的也是为了直接获得三倍体植株。 胚乳的发生类型和发育程度：胚乳处于细胞形成期并仍保持旺盛分生能力。（游离胚乳核时期和成熟胚乳时期均不适合）。 培养基 胚乳培养技术 胚乳培养的器官发生 愈伤组织形成、器官发生 （1）愈伤组织的诱导 （2）愈伤组织的再分化 （3）胚乳苗的生根培养 胚珠和子房培养 柱头 花柱 子房 花梗 花托 花组成 胚囊 卵细胞 株心 珠 孔 反足细胞 珠 被 胚　珠 极核 株柄 1.胚珠培养和子房培养的意义 胚珠培养的意义: 防止杂种胚早期败育，获得杂种植株； 受精前胚珠培养，可作为试管受精的基础； 未受精胚珠培养，能培养获得单倍体植株，用于单倍体育种 子房培养的意义: 获得杂种植株； 未授精子房培养为试管受精提供技术基础； 未受精子房培养能获得获得单倍体植株，用于单倍体育种 2.胚珠培养和子房培养的技术 胚珠培养：将胚珠从母株中分离出来，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以致形成幼苗的过程。 根据胚珠是否受精分为两类： 受精胚珠的培养 未受精胚珠的培养 胚珠培养 胚珠培养的方法 培养受精胚珠，摘取授粉时间合适的子房，如培养未受精胚珠，则在授粉前摘取子房→表面灭菌→剖开子房壁，取出胚珠或带胚珠的胎座接种培养。 影响胚珠培养成功的因素 材料的选择 发育时期 胎座组织 培养基 子房培养：将子房从母株上摘下，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。包括授粉子房和未授粉子房培养。 受精后的子房仍需进行表面消毒后再接种。而未受精子房可将花被表面消毒后，在无菌条件下直接剥取子房接种。 子房培养只需较简单的培养基即可形成果实，并含成熟种子。 授粉或授粉后的子房 表面消毒 接种培养 子房培养 影响子房培养的因素 材料的选择：品种间的差异、胚囊发育时期 培养基：基本培养基、激素、蔗糖（3-10%） 接种方式：要注意极性；营养吸收 单倍体来源和发育途径 由助细