免疫学检测().ppt

* Defibrinated blood, ficoll isopaque, granulocytes and platelets * Emit, 散射光信号检测细胞大小及内部结构，如:胞浆内颗粒多少, 核质比。 荧光信号：每种荧光染料均有特定的激发波长, 激发后会有发射波长, 流式细胞仪检测的即是它特定的发射波长。 * Strategies for bone marrow transplantation: In bone marrow transplantation, the most crucial factor in donor selection is class?II MHC compatibility. Once again an identical twin is the ideal donor. From poorly matched grafts, T lymphocytes can be removed using monoclonal antibodies. The recipient must be immunosuppressed. Malignant cells must be eliminated from the recipient blood (in case of blood?borne malignancies). Methotrexate, cyclosporin and prednisone are often used to control GVH disease. Other grafts: Corneal grafts do not contain D region antigens and consequently survival is frequent. Small grafts are better and corticosteroids are helpful. Skin allograft have very poor success rate and immunosuppressive therapy is relatively ineffective. Nevertheless, they are often used to provide a temporary covering to promote healing in severe skin damage. Indeed, there will be no rejection, if the host and donor are perfectly matched (identical twins) or the recipient is tolerant to the donor MHC antigens (bone marrow chimeras). * Saline, thymidine, * * Nucleosome, * 流式细胞仪检测细胞凋亡 细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸（PS）从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。Annexin V是一种Ca+依赖的磷脂结合蛋白，最初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白，Annexin V具有易于结合到磷脂类如PS的特性。对PS有高度的亲和性。因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。因此，可以建立一种用Annexin V结合在细胞膜表面作为凋亡的指示并结合一种染料排除试验以检测细胞膜的完整性的检测方法。 结果判断：凋亡细胞对所有用于细胞活性鉴定的染料如PI有抗染性，坏死细胞则不能。细胞膜有损伤的细胞的DNA可被PI着染产生红色荧光，而细胞膜保持完好的细胞则不会有红色荧光产生。因此，在细胞凋亡的早期PI不会着染而没有红色荧光信号。正常活细胞与此相似。在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，为（FITC-/PI-）；右上象限是非活细胞，即坏死细胞，为（FITC+/PI+）；而右下象限为凋亡细胞，显现（FITC+/PI-）。 * “OT”即结核菌素， OT试验是要检查机体是否已受过结核菌的感染而产生免疫力。机体受结核杆菌感染4～8周后，即可产生免疫变态反应，结核菌素试验（OT试验）就是利用机体的