大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定课件.doc

大肠杆菌营养缺陷型菌株的诱变和筛选鉴定 关于菌株的几个概念：野生型菌株：从自然界分离到的微生物在其发生突变前的原始状态。 营养缺陷型：野生型菌株经过人工诱变或自然突变失去合成某种营养的能力，只有在基本培养基中补充所缺乏的营养因子才能生长。原养型：营养缺陷型菌株经回复突变或重组后产生的菌株，其营养要求在表型上和野生型相同 关于培养基：基本培养基（minimal medium，MM）：仅能满足微生物野生型菌株生长需要的培养基，用[－]来表示。完全培养基（complete medium，CM）：凡可满足一切营养缺陷型菌株营养需要的天然或半组合培养基。用[＋]来表示。补充培养基（supplemental medium，SM）：凡只能满足相应的营养缺陷型生长需要的组全培养基，它是在基本培养基中加入该菌株不能合成的营养因子而组成。本实验选用为诱变剂，逐个测定法一、目的了解营养缺陷型突变株选育的原理。 学习并掌握细菌氨基酸营养缺陷型的诱变、筛选与鉴定方法。筛选营养缺陷型菌株一般具有四个环节：诱变处理、营养缺陷性的浓缩、检出、鉴定缺陷型。　　本实验选用为诱变剂，逐个测定法离心机，紫外线照射箱，冰箱，恒温箱，高压灭菌锅；三角烧瓶，试管，离心管，(一)菌种(二)培养基 葡萄糖 0.5 g，(NH4)2SO4 0.1 g，柠檬酸钠 0.1 g，MgSO4·7H2O 0.02 g，K2HPO4 0.4 g，KH2PO4 0.6 g，重蒸水 100 mL，pH 7.2，灭菌 20 min。 配固体培养基时需加 2%洗涤处理过的琼脂全部药品需用分析纯，使用的器皿 需用蒸馏水或重蒸水冲洗 2~3 次。需加 2%的琼脂营养缺陷型浓缩营养缺陷型检出营养缺陷型在同一平皿上测定一种缺陷型菌株对许多种生长因子的需求情况为生长谱法。 单一生长因子：鉴定氨基酸或维生素的营养缺陷型，较为简便的方法是分组测定法。 将21种氨基酸，组合6组，每6种不同氨基酸归为一组。如果以15种维生素进行测定，则把5种维生素归为一组，共5个组合。 组别 氨基酸组合组 1 赖氨酸 精氨酸 蛋氨酸 胱氨酸 亮氨酸 异亮氨酸 2 缬氨酸 精氨酸 苯丙氨酸 酪氨酸 色氨酸 组氨酸 3 苏氨酸 蛋氨酸 苯丙氨酸 谷氨酸 脯氨酸 天冬氨酸 4 丙氨酸 胱氨酸 酪氨酸 谷氨酸 甘氨酸 丝氨酸 5 鸟氨酸 亮氨酸 色氨酸 脯氨酸 甘氨酸 谷氨酰胺 6 胍氨酸 异亮氨酸 组氨酸 天冬氨酸 丝氨酸 谷氨酰胺 ?? ? ? ? ? ? ? ?组别 维生素组合组 1 维生素A 维生素B1 维生素B2 维生素B6 维生素B12 2 维生素C 维生素B1 维生素D2 维生素E 烟酰胺 3 叶酸 维生素B2 维生素D2 胆碱 泛酸钙 4 对氨基苯甲酸 维生素B6 维生素E 胆碱 肌醇 5 生物素 维生素B12 烟酰胺 泛酸钙 肌醇 平板表面分别沾上沾有混合氨基酸(或酪素水解液)的滤纸片，30培养 24h，经培养后营养物质周围有生长圈，即表明为氨基酸的营养缺陷型菌株。营养缺陷型检出 营养缺陷型,5任意区域有生长圈生成即对应为相应氨基酸营养缺陷型菌株。 七、结论与讨论 结论：本实验选用为诱变剂，逐个测定法实验中的突变型是氨基酸缺陷型，我们可以检测的，如果是与N元素代谢有关的其他缺陷型，我们无法通过这个检测。 3 右图中1、2、3、4、5均为氨基酸组合 5 4 2 1 3 腺嘌呤 B组维生素 嘧啶 叶酸 图1