dna重组导入和重组子的筛选.ppt
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重组DNA导入受体细胞.ppt
第七章重组DNA导入受体细胞转化过程中，这些分子同时被转移到宿主细胞内。1未连接的分子即使被细菌摄取，只有在特殊的条件下才能复制，寄主的酶可降解这些DNA片段。2自连的载体和错误插入的重组质粒可以进入宿主细胞进行正常的复制3转化方法01自然界中，转化并不是细菌遗传信息传递的主要方式，实验室中只有小部分的细菌可以很容易的转化。正常条件下，大部分细菌包括大肠杆菌，只能吸收有限的DNA，为了提高转化效率，建立了一系列的转化方法：02供体菌游离DNA供体菌DNA（转化因子）转化示意图热激法转化感受态细胞01PEG介导的原生质体转化02高压电穿孔法转化03显微注射法转化04接合转化05噬菌体转染06大肠
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重组DNA导入受体细胞.ppt
关于重组DNA导入受体细胞第1页，共25页，星期日，2025年，2月5日转化转染转导接合转移1.重组体导入细菌细胞（1）大肠杆菌重组质粒DNA分子进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程称之为转化（transformation)。转化不仅适合于大肠杆菌受体细胞，而且适合于枯草杆菌和蓝藻等其他原核生物以及酵母等低等真核生物受体细胞。化学诱导感受态法电转化感受态细胞（competencecell）是指处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态的细胞。★★第2页，共25页，星期日，2025年，2月5日I.化学诱导感受态法原理：E.coli细胞处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，细胞膨胀成球形，细
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重组DNA导入受体细胞课件.ppt
关于重组DNA导入受体细胞第1页，讲稿共25页，2023年5月2日，星期三转化转染转导接合转移1.重组体导入细菌细胞（1）大肠杆菌重组质粒DNA分子进入受体细胞，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程称之为转化（transformation)。转化不仅适合于大肠杆菌受体细胞，而且适合于枯草杆菌和蓝藻等其他原核生物以及酵母等低等真核生物受体细胞。化学诱导感受态法电转化感受态细胞（competencecell）是指处于能吸收周围环境中DNA分子的生理状态的细胞。★★第2页，讲稿共25页，2023年5月2日，星期三I.化学诱导感受态法原理：E.coli细胞处于0℃，CaCl2的低渗溶液中，细胞膨胀成球形
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重组DNA分子的模拟操作-课堂导入.doc
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重组DNA分子的模拟操作
课堂导入
创设情境，导入新课
世界上本来是没有蓝玫瑰的，但科学家通过对DNA分子进行重组操作，已经使白玫瑰表达出蓝色的性状，获得了美丽芬芳的蓝玫瑰。它是通过几步操作获得的呢？
设计思路：
基因工程是现代生物技术的核心内容，但因为DNA分子是微观的肉眼不可见的生物大分子，所以DNA的重组是非常抽象的内容，仅仅靠学生的想象，是很难融会贯通的；而现在的学生更乐于实际动手操作进行体验式学习。在新课的导入环节，采用创设真实的情景，引导学生思考导入本节内容。
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重组子导入和筛选精美生物医学.ppt
酵母酵母菌是研究基因表达最有效的单细胞真核微生物。其基因组小，世代时间短，有单倍体双倍体两种形式，繁殖迅速，无毒性。能外分泌，产物可糖基化。已有不少真核基因成功表达。重组子的筛选和鉴定根据载体的性状变化进行筛选根据载体的抗药性标记进行筛选01载体上的抗药基因：02抗氨苄青霉素基因03抗四环素基因04抗卡那霉素基因等05凡是转入了载体的细胞都获得了这种06抗药性，可以在平板上生长菌落。当带有完整抗药性基因的载体转化无抗药性细胞后，凡转入载体的细胞都获得了抗药性，能在含有相应药物的琼脂平板上生长成菌落，而未被转化的宿主细胞不能生长。根据载体抗药性标志插入失活选择
含有两个以上的抗药基因的载体，外源
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目的基因导入受体细胞及重组子的筛选.ppt
关于目的基因导入受体细胞及重组子的筛选第1页，讲稿共39页，2023年5月2日，星期三第一节受体细胞受体细胞（receptorcell）：又称宿主细胞或寄主细胞（hostcell），从实验技术上讲是能摄取外源DNA并使其稳定维持的细胞；从实验目的上讲是有应用价值和理论研究价值的细胞。随着基因工程的发展，从低等的原核细胞，到简单的真核细胞，进一步到结构复杂的高等动、植物细胞都可以作为基因工程的受体细胞。1.受体细胞的概念第2页，讲稿共39页，2023年5月2日，星期三2.受体细胞选择所应遵循的原则便于重组DNA分子导入。能使重组DNA分子稳定存在于细胞中。（如：限制性内切酶缺陷型，避免其对重组D
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目的基因导入受体细胞及重组子的筛选.ppt
关于目的基因导入受体细胞及重组子的筛选第1页，共39页，星期日，2025年，2月5日第一节受体细胞受体细胞（receptorcell）：又称宿主细胞或寄主细胞（hostcell），从实验技术上讲是能摄取外源DNA并使其稳定维持的细胞；从实验目的上讲是有应用价值和理论研究价值的细胞。随着基因工程的发展，从低等的原核细胞，到简单的真核细胞，进一步到结构复杂的高等动、植物细胞都可以作为基因工程的受体细胞。1.受体细胞的概念第2页，共39页，星期日，2025年，2月5日2.受体细胞选择所应遵循的原则便于重组DNA分子导入。能使重组DNA分子稳定存在于细胞中。（如：限制性内切酶缺陷型，避免其对重组DNA
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重组DNA的构建、筛选及鉴定分析.ppt
01020304转化是感受态的大肠杆菌细胞捕获和表达DNA分子的基因转化方法显微注射技术是一种利用显微注射仪，通过机械方法把外源DNA直接注人细胞质或细胞核的基因转化方法转导是指通过噬菌体将一个宿主的DNA转移到另一个宿主的细胞中而引起的基因重组现象电转化法也称为电穿孔法在细胞上施加短暂、高压的电流脉冲，结果在质膜上形成纳米大小的微孔，DNA能直接通过这些微孔，或者在膜孔自行修复闭合时伴随膜组分的重新分布而进人细胞质中三重组DNA分子导入受体菌基因枪法，又称微弹轰击法是利用高速运行的金属颗粒轰击细胞时能进人细胞内的现象，将包裹在金属颗粒表面的外源DNA分子随之带人细胞进行表达的基因转化方法。0
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实验六、dna的连接重组质粒转化筛选.ppt
实验六、DNA的连接、重组质粒的转化及筛选;一、概述;1．外源DNA片段和质粒载体的连接反应策略;1．外源DNA片段和质粒载体的连接反应策略;2．pBS重组质粒的筛选原理;2．pBS重组质粒的筛选原理;二、操作步骤;1．连接反应;2、 细胞转化;３. 重组子筛选;３. 重组子筛选
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第4讲DNA体外重组与转化宿主细胞及其筛选与检测分解.ppt
荷兰植物生物技术公司将编码大肠杆菌海藻糖-6-磷酸合成酶和海藻糖-6-磷酸酯酶的编码基因otsA和otsB基因克隆，构建成一个操纵子otsBA，将其导入甜菜、马铃薯中，增加了甜菜和马铃薯中海藻糖的含量，同时增强了转基因植株的抗旱性和抗寒性。 3、甜菜碱合成相关基因 CMO：胆碱单加氧酶 CDH：胆碱脱氢酶 BADH：甜菜碱醛脱氢酶 COD：胆碱氧化酶 在0%、0.3%、0.6%NaCl胁迫下，转BADH基因马铃薯的生长状况 非转基因植株 转基因植株 液体培养法诱导的马铃薯Favorita的试管薯 （
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DNA的重组.ppt
DNA的重组 DNA Recombination Holliday模型中，同源重组主要有4个关键步骤 ①两个同源染色体DNA排列整齐。 ②一个DNA的一条链断裂、并与另一个DNA对应链连接，形成Holliday中间体。 ③通过分支移动产生异源双链DNA。 ④Holliday中间体切开并修复，形成两个双链重组体DNA。 同源重组的意义 同源重组是最基本的重组方式，参与各种重要的生物学过程。 同源重组与DNA复制和重组修复过程密切相关。 同源重组在基因加工、整合和转化中起重要作用。 （二）同源重组有关的酶： RecA蛋白 R
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重组体的筛选.ppt
Southern杂交定位kan抗性基因添加标题直接凝胶电泳检测法添加标题利用有插入片段的重组载体的分子量比野生型载体分子量大。添加标题从转化后的菌体克隆中分离质粒，电泳、比较其分子量。添加标题分子量Marker添加标题载体添加标题重组克隆实验步骤bp—1534—994—695—515—377—237ABCM单击此处添加小标题酶切电泳筛选法单击此处添加小标题原理单击此处添加小标题根据已知的外源DNA序列的限制性酶切图谱，选择一两种内切酶切割质粒，电泳后比较电泳结果（DNA带数和长度）单击此处添加小标题用合适的内切酶切下插入片断，再用其它酶切这个片断，电泳后比较结果。ABA或B不同克隆的酶切结果筛
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DNA重组及重组DNA技术.ppt
重组DNA医药产品 产 品 功 能 组织胞浆素原激活剂 抗凝 血液因子VIII 促进凝血 颗粒细胞-巨噬细胞集落剌激因子 剌激白细胞生成 促红细胞生成素 剌激白细胞生成 生长因子(bFGF, EGF) 刺激细胞生长与分化 生长素 治疗侏儒症 胰岛素 治疗糖尿病 干扰素(? 1b, ?2a, ? 2b, ?) 抗病毒感染及某些肿瘤 白细胞介素 激活、剌激各类白细胞 超氧化物歧化酶 抗组织损伤 单克隆抗体 利用其结合特异性进行诊断试验、肿瘤导向治疗 乙肝疫苗(CHO, 酵母) 预防乙肝 口服重组B亚单位菌体霍乱菌苗 预防霍乱 二、重组DNA技术还应用于医学的其他诸多方面 疾病相
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【2017年整理】第六章 目的基因导入受体细胞及重组子的筛选.ppt
第六章
目的基因导入受体细胞及重组子的筛选;第一节 受体细胞;2.受体细胞选择所应遵循的原则;受体细胞在遗传密码的应用上无明显的偏倚性。
具有较好的转译后加工机制，便于真核目的基因的高效表达。
在理论研究和生产实践上有较高的应用价值。;3.各种类型受体细胞的优缺点;■缺点
由于原核细胞缺乏真核生物具有的RNA转录后加工、修饰系统、蛋白质翻译后加工、修饰、折叠复性系统，使某些真核细胞中编码蛋白的基因不能够在原核细胞中表达，甚至即使获得了表达，也不具有正常的生物学活性。
■常用作受体细胞的原核生物：大肠杆菌、枯草杆菌、蓝藻等。
大肠杆菌：基因背景清楚，繁殖迅速，培养简单。
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大肠杆菌感受态细胞的制备、质粒DNA的转化和重组子筛选.pdf
大肠杆菌感受态细胞的制备、
质粒DNA的转化和重组子筛选
分子生物学实验
牛卫宁
目的要求
1.了解转化的概念及其在分子生物学
研究中的意义。
2.学习氯化钙法制备大肠杆菌感受
态细胞的方法。
3.学习将外源质粒 DNA 转入受体菌
细胞并筛选重组子的方法。
实验原理
转化( Transformation )是将异源DNA 分子引入另
一细胞品系，使受体细胞