雷公藤多甙抗急性移植物抗宿主病的实验分析.pdf

中文摘要 目 的 异基因骨髓移植与外周血干细胞移植是许多血液、遗传病及恶性肿瘤 放、化疗后的重要治疗手段，它为患者提供了长期缓解或根治豹机会。移植 后，产生的移植物抗宿主病(Graft—Versus—Host Graft—Versus—Host aGVHD(acute 此，预防和治疗aGVHD是当前骨髓移植急待解决的课题之一。 目前认为，供、受者主要和次要组织相容性抗原的差异是引起aGVHD 的根本原因。其中T细胞具有至关重要的作用。其中cWT细胞，主要是 种细胞因子促进aGVHD的发生、发展。基予上述理论，目前临床防治 体，以清除T细胞；或将”自杀”基因导入供者T细胞，以调控供者T细胞的 数量；3．针对某些细胞因子的单克隆抗体，减轻该细胞因子的作用；针对粘 附分子的单克隆抗体，以阻断其作用等。4．其他某些新药物如Rapamycin、 青霉胺、IL一10也等正开展实验研究或试用临床。上述方法均有明显不足 之处，清除或减少T细胞则会导致骨髓移植的失败，如自血病的复发；长期 应用较强的免疫抑制荆可致严重感染和损伤肝、肾等脏器。临床实践证明： 这些药物在提高生存率方面并不理想。如CsA虽有较高的治疗有效率，但 并不改普生存率。目前，国内、外各大骨髓移植中心尚元统一的治疗方案， 多采用以上药物2—3种联合应用，但却增加了感染病死率，效果也并不好。 这些药物或方案不理想的主要原因是：与抗宿主对移植物的排斥反应不同， 时，还要保留抗白血病效应，过强的免疫抑制作用可以使GVL作用丧失丽 导致骨髓移檀的失败。因此，寻找较温和的药物或方法，使aGVHD即能减 轻，又可保留GVL作用，近几年一直受到国内、外学者的关注。 Wilfordii 雷公藤(Tripterygium 本植物，广泛分布于我国西南、华南及东北地区，为我国首先发现的免疫调 节药物。目前，国内外学者已从雷公藤属植物分离出近70种化学成分，主 要为生物碱类、二萜类、三萜类、倍半萜类及糖类。雷公藤多甙是从TWH 中分离出来的1个含有微量二萜类，少量生物碱及一些三萜类化合物。 Tororum， 多年来我们一直从事对雷公藤多甙(Glueosidorum Tripterygii GTr)的实验研究，证明雷公藤多甙可降低T细胞及亚群的数量，IL一2的 产生及IL-2R的表达，使T细胞对IL一2的反应性下降，抑制T细胞表面 粘附分子(CD。，．、CD，。等)的表达；且可使异基因移植皮片存活时间明显延 长。其抗排斥反应作用介于甲基强地松龙与CsA之间，与两者伍用有更明 显的抑制作用，即雷公藤多甙具有较温和而明显的抑制T细胞及其分泌的 细胞因子的作用。此外，雷公藤多甙还具有抗炎、抗肿瘤作用等。这些研究 结果提示：可望用雷公藤多甙或伍用雷公藤多甙防治aGVHD、保留GVLo 因此，本研究拟应用或伍用雷公藤多甙，阐明其防治aGVHD的作用及机 制。以期将来在防治aGVHD方面，获得疗效显著，更符合我国圈情的新药 应用于临床提供实验依据。 方 法 一、动物模型复制 异基因移植受鼠C”BL／6(H一2。)雄性。各组小鼠均为8—12周龄，体重 209左右。臂髓移植当天颈椎脱臼法处死供鼠，在超净台内无菌取供鼠脾 脏及双侧股骨骨靛，0℃下将脾脏在尼龙网上研磨过滤制成细胞番液，用淋 巴细胞分层液分离脾淋巴细胞，用RPMIl640液调脾淋巴细胞浓度为2× 107／ml。同时，剪开股骨干骺端，用6号半针头，吸入一定量RP烟1640液， 冲出骨髓液，反复3次，而后通过4号针头3次，使其成为单细胞悬液，调骨 x 髓细胞浓度为4 106／ml。将脾细胞与骨髓细胞按体积I：l混合，倦4成混合 细胞悬液(BMC)。受鼠在骨麓移植前24h内应用直线加速器全身照射，总 给受鼠BAUd／C(同基因移植)与受鼠c研BL“(异基因移植)。每只输入0． 5ml，含骨髓纲胞l×106个，脾淋巴细胞5x106个，制成aGVHD模型。