医学免疫学实验—抗原抗体反应.ppt

火箭免疫电泳 火箭免疫电泳 对流免疫电泳 对流免疫电泳实质上是由电泳定向加速的双向扩散 抗原在电泳时从负极向正极移动 抗体由正极向负极移动 实验器材 1：载玻片、打孔器、三角烧瓶、移液管、洗耳球、10%的琼脂、记号笔 2：酒精灯、火柴、电炉、电泳仪、电泳槽 3：微量加样器、抗原及抗体样品 操作步骤 制板 打孔 封底 加样 电泳 3－4ml琼脂 孔间距3mm 约7ul 切割火焰2－3次 总电流＝4mA/cm x 2.5cm(板宽) x N(板数）30分钟 抗原 抗体 对流免疫电泳实验结果 对流免疫电泳 思 考 题 1、对流免疫电泳试验中如果抗原、抗体的正极和负极放反了是否会出现沉淀线？为什么？ 2、抗原抗体反应检测的临床意义有哪些？ 实验操作录像 实验操作录像 实验报告 实验原理 实验方法 实验结果及分析 思考题 参考书籍及网站 * 医学免疫学实验 第一讲抗原抗体反应antigen-antibody reaction 什么是抗原抗体反应？ 抗原与相应抗体的特异性结合反应称为抗原抗体反应。抗原抗体反应既可在体内作为体液免疫应答的效应机制自然发生，也可在体外作为免疫学实验的结果出现。在体内，可表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒素等作用，有时亦可引起免疫病理损伤，在体外，依相应抗原物理性状 (颗粒状或可溶性)以及反应的条件 (电解质、补体等)不同，可出现凝集、沉淀、细胞溶解和补体结合等反应。 抗原抗体反应的基础  抗原抗体反应的特点 1. 特异性 Ab 1 Ab2 Ab3 抗原抗体反应的特点 2.比例 性 抗体过剩 抗原过剩 抗原抗体比例合适 抗原抗体反应的特点 3.可逆性 体外抗原抗体反应的影响因素 电 解 质 温 度 酸 碱 度 作用时间 抗原抗体反应类型 可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应 颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的凝集反应 抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应 细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应 免疫标记的抗原抗体反应。 凝集反应 ---ABO血型的鉴定 实 验 目 的 熟悉凝集反应的定义及血型鉴定实验的原理。 掌握血型鉴定实验的操作及结果的正确观察与判断。 了解血型鉴定实验的用途。 凝集反应 定义：在一定浓度的电解质环境中，颗粒性抗原（红细胞、细菌、 乳胶颗粒等）和相应抗体反应能够产生肉眼可见的凝集块 直接凝集 间接凝集 间接凝集抑制试验 抗球蛋白试验 间接凝集反应 间接凝集抑制 抗球蛋白法检测IgG抗体的原理 抗球蛋白可以和IgG反应 通过搭桥作用使红细胞凝集 概 述 血型系统 Blood group system 1901年发现的人类第一个血型系统---- ABO血型系统发现者----奥地利科学家 Karl Landsteiner ABO血型系统的发现 【实验原理】 血型是指红细胞的血型，是根据红细胞膜外表面存在的特异性抗原（镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白和糖脂）来确定的，这种抗原或凝集原是由遗传决定的 + 实验器材 1：载玻片、采血针、牙签等 2：A型和B型标准血清、酒精棉球 操作步骤 1.取载玻片，酒精消毒正面，在背面标记A和B两区 2.酒精消毒指端皮肤和采血针后，用采血针刺破皮肤，挤出少量血液，涂在玻片A、B两区，并立即用无菌干棉球压迫止血 3.在两区分别滴加一滴抗A定型试剂和抗B定型试剂，立即用牙签混匀 4.静置3分钟，观察凝聚现象，判定实验结果 实验结果 ABO血型检查临床意义 1.输血：输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血完全相合才能输血。 2.母婴ABO血型不合引起的新生儿溶血病，主要是依靠血型血清学检查来诊断。 3.器官移植时受者与供者也必须ABO血型相符合才能移植，血型不符极易引起急性排异反应、导致移植失败。 4.ABO血型与疾病之间的联系也有一些报道，某些看来造血系统无关的疾病实际上可能与红细胞血型抗原有关。 沉淀反应 ----对流免疫电泳 沉淀反应 可溶性抗原在有适量电解质存在的条件下与相应的抗体结合，形成肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应 类型： 沉淀反应 环状沉淀反应 絮状反应 琼脂扩散 单向扩散 双向扩散 ＋ 电泳 火箭电泳 对流免疫电泳 单向扩散 Ag Concentration Diameter2 Ag Ag Ag Ag Ab in gel 单向扩散 双向扩散 即将抗原和抗体分别加入琼脂对应的孔中，二者会向四周扩散， 在形成白色沉淀线。 二者比例合适处 双向扩散 电 泳 定义：即带电颗粒在电场的作用下向着相反的电极移动，称为电泳。