医学免疫学实验一抗原抗体反应.ppt

电 泳 定义：即带电颗粒在电场的作用下向着相反的电极移动，称为电泳。 原理：蛋白质分子在溶液中由于其末端氨基、末端羧基及侧链的游离基团而成为带电颗粒，并可在电场内移动，其移动方向取决于蛋白质分子所带静电荷。不同蛋白质分子根据其氨基酸组成及所在溶液的pH值，携带的静电荷不尽相同，致使它们在电场中的迁移率各异，从而达到分理的目的。 火箭免疫电泳 火箭免疫电泳 对流免疫电泳 对流免疫电泳实质上是由电泳定向加速的双向扩散 抗原在电泳时从负极向正极移动 抗体由正极向负极移动 实验器材 1：载玻片、打孔器、三角烧瓶、移液管、洗耳球、10%的琼脂、记号笔 2：酒精灯、火柴、电炉、电泳仪、电泳槽 3：微量加样器、抗原及抗体样品 操作步骤 制板 打孔 封底 加样 电泳 3－4ml琼脂 孔间距3mm 约7ul 切割火焰2－3次 总电流＝4mA/cm x 2.5cm(板宽) x N(板数）30分钟 抗原 抗体 对流免疫电泳实验结果 对流免疫电泳 思 考 题 1、对流免疫电泳试验中如果抗原、抗体的正极和负极放反了是否会出现沉淀线？为什么？ 2、抗原抗体反应检测的临床意义有哪些？ 实验操作录像 实验操作录像 实验报告 实验原理 实验方法 实验结果及分析 思考题 参考书籍及网站 第10讲 超敏反应 前面讲的免疫应答是“常规战”； 这里讲的超敏反应是“核战争” 超敏反应是机体受到某种抗原剌激 时,出现生理功能紊乱或组织细胞 受损的异常适应性免疫应答。 I型-速发型（变态反应或过敏反应） II型-细胞毒型或细胞溶解型 III型-免疫复合物型或血管炎型 IV型-迟发型 分 型 I型超敏反应 一、发生机制 抗原初次进入 B细胞 浆细胞 抗体 肥大细胞致敏 致敏阶段 组胺 激肽原酶 白三烯 前列腺素 抗原再次进入 致敏的肥大细胞 IgE桥联 释放 发敏阶段 二、基本特征 1.特异性IgE介导，无补体参与。 2.反应发生快，消退亦快。 3.生理功能紊乱, 组织细胞损伤轻微。 4.具有明显个体差异和遗传背景。 三、常见疾病 1.药物过敏性休克 变应原：头孢、链霉素、普鲁卡因、青霉素。 发病特点：发病急，几秒～几分钟； 症状重，休克甚至死亡。 临床症状：胸闷气急、呼吸困难、脸色苍白， 肢冷脉细，血压下降。 2.血清过敏性休克 3.呼吸道过敏反应 过敏性鼻炎和过敏性哮喘 4.消化道过敏反应 鱼虾蟹蛋奶等可引起过敏性胃肠炎， 出现恶心、呕吐、腹痛和腹泻症状。 药物、食物、寄生虫或冷热光刺激 等引起的荨麻疹,特应性皮炎（湿疹） ，血管性水肿。 4.皮肤过敏反应 荨麻疹 湿疹 四、防治原则 皮肤试验 1.预防原则 重在预防 取在受试者前臂内测 作皮内注射，15~20分钟后 观察结果。若局部皮肤出 现红晕、风团直径1cm为 皮试阳性。 查明变应原，避免再次接触（最有效） 变应原已查明，如花粉、尘螨等，可小剂量、 长间隔、反复皮下注射变应原作减敏治疗。 异种免疫血清脱敏疗法 2.脱敏治疗 皮试阳性又必须使用者，可小剂量、短间隔（20～30分钟）多次注射方法进行脱敏治疗。 特异性变应原脱敏疗法 3.药物治疗 阿司匹林、色甘酸二钠、 肾上腺素、糖皮质激素。 抑制生物活性介质合成和释放的药物 生物活性介质拮抗药 抗组胺：苯海拉明、扑尔敏、异丙嗪 抗缓激肽：乙酰水杨酸 Company Logo 医学免疫学实验 病原生物学与免疫学教研室 Tel: 姓名 第一讲抗原抗体反应antigen-antibody reaction 什么是抗原抗体反应？ 抗原与相应抗体的特异性结合反应称为抗原抗体反应。抗原抗体反应既可在体内作为体液免疫应答的效应机制自然发生，也可在体外作为免疫学实验的结果出现。在体内，可表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒素等作用，有时亦可引起免疫病理损伤，在体外，依相应抗原物理性状 (颗粒状或可溶性)以及反应的条件 (电解质、补体等)不同，可出现凝集、沉淀、细胞溶解和补体结合等反应。 抗原抗体反应的特点 1. 特异性 Ab 1 Ab2 Ab3 抗原抗体反应的特点 2.比例 性 抗体过剩 抗原过剩 抗原抗体比例合适 抗原抗体反应的特点 3.可逆性 体外抗原抗体反应的影响因素 电 解 质 温 度 酸 碱 度 作用时间 抗原抗体反应类型 可溶性抗原与相应抗体结合所产生的沉淀反应 颗粒性抗原与相应抗体结合所发生的凝集反应 抗原抗体结合后激活补体所致的细胞溶解反应 细菌外毒素或病毒与相应抗体结合所致的中和反应 免疫标记的抗原抗体反应。 凝集反应 ---ABO血型的鉴定 实 验 目 的 1. 熟悉凝集反应的定义及血型鉴定实验的原理。 2