甘蓝型油菜小孢子发育.ppt

**生教112蔡志标**甘蓝型油菜游离小孢子培养的胚胎发育**目录实验材料实验方法实验结果实验讨论**实验材料中双1号中双3号中双82189008**实验方法冬性甘蓝型油菜供体植株生长到三片真子叶时，转移到人工培养箱中，进行春化处理，一个月之后，与春型品种一起置于非控温温室中，温度大约在15至35摄氏度。光照仅来自自然光，不加补充光照。**新闻要点在甘蓝型油菜小孢子培养中只有单核晚期细胞的小孢才可能发育成胚状体。培养3天后，在16%蔗糖培养基中存活的小孢子最多，达16、13%，培养30天后，胚状体诱导频率则以13%蔗糖浓度为最高，每花蕾可达144个胚状体。**甘蓝型油菜游离小孢子胚状体的诱导方法游离小孢子培养是植物单倍体育种的重要手段之一，通过单倍体染色体加倍，可迅速获得纯合的2倍体，成为遗传稳定的品系。自Lichter等(1982)首次进行甘蓝型油菜游离小孢子培养和植株再生获得成功以来，国内外已进行了较多的应用研究，并建立了一些培养技术体系，现将其方法介绍如下。**甘蓝型油菜游离小孢子胚状体的诱导方法花蕾的选择和采集当供体植株的第1朵花开时，取主花序上长度为2.5～3.5mm的花蕾（用解剖镜观察可见花药为淡绿色透明状），用45%醋酸洋红压片检查花粉发育时期，可见有的花粉正处于单核靠边期，有的处于双核初期或双核期，本试验选取正处于单核靠边期的花蕾，这样的花蕾在每个主花序上约6～10个。**甘蓝型油菜游离小孢子胚状体的诱导方法花蕾消毒将采集的花蕾用70%的乙醇消毒20～30s，转入7%的NaClO中浸泡10～15min，然后用无菌水洗涤3次，每次5min。培养基pH=5.8～6.0，小孢子提取液采用B5培养液，诱导小孢子胚状体产生用蔗糖浓度为13%的NLN培养液（也称NLN13培养基）。**花粉小孢子游离及收集将消毒好的花蕾置于小烧杯中，加B5培养液，用小三角瓶将小孢子压出，通过300目尼龙网膜过滤到离心管里，于800转/min的速度下离心2min，倒掉上清液；再加入B5培养液，于1000转/min的速度下离心1min，倒掉上清液；再加B5培养液，于1000转/min的速度下离心1min，重复2次，最后倒出上清液，向离心管中加入少量NLN液体培养基，分装到60mm×15mm的培养皿中培养。游离花粉小孢子培养将盛有游离花粉小孢子的培养皿放于25℃的黑暗培养箱中，采用液体浅层静置培养。甘蓝型油菜游离小孢子胚状体的诱导方法**实验影响供体植珠的花期对胚状体诱导频率的影响供体植珠的花期对小孢子发育一致性以及在培养中小孢子形态发生的影响不同蔗糖浓度对小孢子活力以及胚状体诱导频率的影响加液培养对胚状体诱导频率的影响**实实验结果**一、不同花期对胚状体诱导频率的影响胚体品种开花期（天）1234567中双一号中双3好中双82189008000000000010、6006、65、250014、421、24、52、45、0017、317、2000**花期小孢单早子发核中育期期晚二核期三核期培养3天后小孢子胚状体数0244、54、73、536、633、916、356、457、677、22、53、83、0000极少极少部分006、7二、供体植株的花期对小孢子发育的影响**logo不同蔗糖浓度对胚状体诱导频率的影响品质蔗糖浓度%10131619中双00144、012、582、08、500**四、蔗糖浓度以及加液对胚状体诱导频率的影响品种16加液蔗糖浓度不加液（%）13加液不加液中双1号中双3号中双82189003平均值31、510、530、038、027、56、02、510、08、56、822、510、021、013、516、89、03、57、59、57、4****************