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土壤酶活性测定方法

土壤脲酶的测定方法（苯酚钠—次氯酸钠比色法）

一、原理

脲酶存在于大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅

能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脲酶活性，与土壤的微生物数量、

有机物质含量、全氮和速效磷含量呈正相关。根际土壤脲酶活性较高，中性土壤脲酶活性大

于碱性土壤。人们常用土壤脲酶活性表征土壤的氮素状况。

土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定

未水解的尿素量来求得。本方法以尿素为基质，根据酶促产物氨与苯酚—次氯酸钠作用生成

蓝色的靛酚，来分析脲酶活性。

二、试剂

1）甲苯

2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。

3）柠檬酸盐缓冲液（PH6.7）：184g柠檬酸和147.5g氢氧化钾（KOH）溶于蒸馏水。将两

溶液合并，用1mol/LNaOH将PH调至6.7，用水稀释定容至1000ml。

4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5g苯酚溶于少量乙醇，加2ml甲醇和18.5ml丙酮，用乙

醇稀释至100ml（A液），存于冰箱中；27gNaOH溶于100ml水（B液）。将A、B溶液

保存在冰箱中。使用前将A液、B液各20ml混合，用蒸馏水稀释至100ml。

5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%，溶液稳定。

6）氮的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水并稀释至1000ml，得到1ml含有0.1mg

氮的标准液；再将此液稀释10倍（吸取10ml标准液定容至100ml）制成氮的工作液

（0.01mg/ml）。

三、操作步骤

称取5g土样于50ml三角瓶中，加1ml甲苯，振荡均匀，15min后加10ml10%尿素溶

液和20mlPH6.7柠檬酸盐缓冲溶液，摇匀后在37℃恒温箱培养24小时。培养结束后过滤，

过滤后取1ml滤液加入50ml容量瓶中，再加4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠溶液，随加随

摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计与578nm波长处比色。（靛酚的蓝色在1h

内保持稳定）。

标准曲线制作：在测定样品吸光值之前，分别取0、1、3、5、7、9、11、13ml氮工作

液，移于50ml容量瓶中，然后补加蒸馏水至20ml。再加入4ml苯酚钠溶液和3ml次氯酸钠

溶液，随加随摇匀。20min后显色，定容。1h内在分光光度计上于578nm波长处比色。然

后以氮工作液浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

注意事项:

1、每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的蒸馏水代替基质，其他操作与样品

实验相同，以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。

2、整个实验设置一个无土对照，不加土样，其他操作与样品实验相同，以检验试剂纯

度和基质自身分解。

3、如果样品吸光值超过标曲的最大值，则应该增加分取倍数或减少培养的土样

四、结果计算：以24小时后1g土壤中NH－N的毫克数表示土壤脲酶活性（Ure）。

3

Ure=（a样品－a无土－a无基质）×V×n／m

式中：a样品为样品吸光值由标准曲线求得的NH－N毫克数；

3

a无土为无土对照吸光值由标准曲线求得的NH－N毫克数；

3

6

a无基质为无基质对照吸光值由标准曲线求得的NH－N毫克数；

3

V为显色液体积；n为分取倍数，浸出液体积／吸取滤液体积；m表示烘干土重

土壤磷酸酶活性测定（磷酸苯二钠比色法）

一、原理

测定磷酸酶主要根据酶促生成的有机基团量或无机磷量计算磷酸酶活性。前一种通常称为有

有机基团含量法，是目前较为常用的测定磷酸酶的方法