NY/T 680-2003禽白血病病毒p27抗原酶联免疫吸附试验方法.pdf
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ICS 11.220
R 41
中华 人 民共 和 国农 业 行 业标 准
NY/T680-2003
禽 白血 病 病 毒 p27抗 原
酶 联 免 疫 吸 附 试 验 方 法
Enzyme-linkedimmunosorbentassay
foravianleukosisvirusp27antigen
2003-07-30发布 2003-10-01实施
中华人民共和国农业部 发 布
NY/T680-2003
前 言
本标准的附录A为规范性附录
本标准由农业部畜牧兽医局提出并归口。
本标准起草单位:农业部兽医诊断中心。
本标准主要起草人:陈西钊、苏敬良、王宏伟、田克恭、吴清民、王传彬
NY/T680-2003
禽 白血 病 病 毒 p27抗 原
酶 联 免 疫 吸 附 试 验 方 法
范围
本标准规定了禽白血病病毒(ALV)p27抗原酶联免疫吸附试验方法
本标准适用于检测鸡蛋蛋清以及鸡胚组织细胞培养物中的ALVp27蛋白抗原口
2 p27抗原酶联免疫吸附试验
2.1 试验材料
2.1.1 试剂
2.1.1.1 抗p27蛋白抗体:应用提纯的禽成髓细胞性白血病病毒p27蛋自免疫家兔制备。
2.1.1.2 阳性抗原:含鸡白血病/肉瘤病毒群特异性p27蛋白抗原的鸡蛋清
2.1.1.3 阴性抗原:无鸡白血病/肉瘤病毒群特异性p27蛋白抗原的SPF鸡蛋清。
2.1.1.4 酶结合物:辣根过氧化物酶标记的抗p27蛋白抗体
2.1.1.5 磷酸盐缓冲液(PBS):配制见第A.1章
2.1.1.6 包被液:配制见第A.2章
2.1.1.7 洗涤液:配制见第A.3章。
2.1.1.8 样品稀释液:配制见第A.4章
2.1.1.9 底物溶液:配制见第A.6章。
2.1.1.10 终止液:配制见第A.7章
2.1.2 器材
a) 酶联检测仪;
b) 聚苯乙烯板;
c) 微量加样器，容量50川^-200p工;
d) 37℃恒温培养箱
2.1.3 样品
2.1.3.1鸡蛋样品:将待检鸡蛋小的一端朝上放置，打碎蛋壳，用移液器无菌吸取蛋清，密装于灭菌小
瓶内。
2.1.3.2 细胞培养物:用移液器无菌吸取细胞培养物，密装于灭菌小瓶内，10(或一30℃保存或立即送
检。试验前将送检样品统一编号，试验时不做稀释口
2.2 操作方法
2.2.1用包被液将抗p27蛋白抗体作4000倍稀释，每孔100川 加入96孔聚苯乙烯板中，4℃过夜。
2.2.2 取出包被好的聚苯乙烯板，将液体倒弃，每孔加250川_洗涤液漂洗三次，每次2min，甩干。
2.2.3 每孔加150阿_质量浓度为1%的明胶封闭液,37℃反应60min
2.2.4 重复2.2.2
2.2.5 在A,,A:孔各加100pL标准阴性对照，A ,A 孔各加100川 标准阳性对照
2.2.6 将待检样品加人其他各孔，每个待检样本加两孔，每孔700川,370(_反应60min,
2.2.7 重复2.2.2e
2.2.8 每孔加 100沁 工作浓度的辣根过氧化物酶标记的抗p27蛋自抗体 37℃反应60mine
NY/T680-2003
2.2.9 重复2.2.2
2.2.10 衍孔加 100川 新配制的底物溶液，室温，避光反应 10min
2.2.11 征孔加 100p1终止液口
2.2.12 置酶联检测仪于450nm测定各孔吸光度(OD)值。
2.3 结果判定
2.3.1 阻性对照 ()D均值等于(A,孔OD值+A:孔 ()D值)2;阳性对照OD均值等于(A:孔OD
值+A 孔 ()D值)/2
2.3.2 阴性对照O(D均值小于。.15，阳性对照OD均值减去阴性对照01)均值大于。
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