百草枯降解菌的分离鉴定及降解特性研究.doc

百草枯降解菌的分离鉴定及降解特性研究 　　摘 要：从沾化百草枯污染土壤中富集、筛选、分离出3株具有百草枯降解能力的菌株，进一步研究了这3株优势菌的生理生化特征及最佳生长条件。通过形态学观察和生理生化指标的测定，对这3株菌种进行鉴定，初步确定：BCK-1为颤螺菌属，BCK-2为梭菌属，BCK-3为芽孢盐杆菌属。这3株菌株在37℃培养3d后，发现这3株菌株（BCK-1，BCK-2，BCK-3）对百草枯的降解率分别为79.35%、80.26%和86.22%。3株优势菌种可应用于受百草枯污染的菌源土壤的生物恢复。 　　关键词：百草枯降解菌；分离；鉴定 　　中图分类号 S48 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）08-38-03 　　Abstract：Three strains were isolated from the Zhanhua paraquat contaminated soil，and optimal growth conditions were further studied on the physiological and biochemical characteristics of the three dominant bacteria. The Determination by morphological observation，physiological and biochemical indicators were identified，these three strains are initially identified BCK-1 Oscillosporia ChattonPerard，BCK-2 for Clostridium Prazmowski，BCK-3 Sporohalobacter Orenetal. These three strains at 37℃ after 3d found three strains （BCK-1，BCK-2，BCK-3）and the degradation rate of paraquat were 79.35%，80.26% and 86.22%，respectively. The three dominant strain can be applied to paraquat contaminated bacteria source soil biological recovery. 　　Key words：Paraquat degrading bacteria；Separate；Appraisal 　　百草枯是一种被广泛使用的人工合成有机农药，具有杀草活性高、选择性强、用量少等优点，已成为滨州地区用量最大的除草剂之一。但在农业生产中广泛应用的同时，百草枯也不可避免的在土壤中残留[1]，从而抑制土壤中微生物的生长，降低土壤的肥力，以及对非靶标的陆上或水生生物产生危害，最终影响农产品质量和人们的身体健康[2]。 　　随着生物技术的发展，应用微生物降解农药残留具有安全性好、效果好、费用低、处理彻底、无二次污染等优点。利用微生物降解百草枯及修复被污染的土壤[3]，将具有十分广泛的应用前景[4]。目前，国外所报告的对百草枯有降解作用的微生物主要有放线菌、真菌、细菌等，我国关于百草枯降解菌的报道较少，其中在《百草枯降解菌研究初报》中，延安大学高小朋、王海虹、陈彦羽从长期喷施百草枯的土壤中经富集、筛选[5]，得到4株百草枯降解菌。 　　本研究从滨州沾化百草枯污染的土壤中富集、筛选、分离出3株降解菌株，并且通过形态学观察和生理生化特征的测定对其进行了初步鉴定，同时进一步研究了它们的最佳生长条件和降解特性。 　　1 材料与方法 　　1.1 供试材料 菌株来源：滨州沾化百草枯污染土壤；培养基：富集培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、以百草枯为唯一碳源的培养基、全营养培养基。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 菌源的富集 从长期使用百草枯的农田中取土样，富集培养。 　　1.2.2 百草枯降解菌株的分离[6] （1）制备菌悬稀释液：稀释度到10-5稀释液，待用。（2）分离单菌株：将稀释后的稀释菌液分别涂布到牛肉膏蛋白胨培养基中，37℃恒温培养48～72h。随后在以百草枯为唯一碳源培养基上划线分离。培养后，挑取单菌落接种于斜面保藏在4℃冰箱中。 　　1.2.3 菌株降解百草枯 挑取平板上的单菌落按4%的接种量接入以百草枯为唯一碳源的液体培养基[7]，28℃、150r/min条件下振荡培养2d。在相同的培养条件下，设置不接种的以百草枯为唯一碳源的液体培养基作对照。 　　1.2.4 选出优势菌种并测定降解率 以稀释涂平板法、分光光度计法进