免疫共沉淀优质课件可编辑.ppt

免疫共沉淀免疫共沉淀CHIPIP蛋白——蛋白染色质——蛋白IP原理以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarosebeads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离，对B蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。这种方法得到的目的蛋白是在细胞内与兴趣蛋白天然结合的，符合体内实际情况，得到的结果可信度高。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。Argarose-beads-proteinA/G-antibody-antigen复合物A-B-antibody复合物A-B复合物IP优点（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；（3）可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。IP缺点（1）可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用；（2）两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用；（3）必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，所以，若预测不正确，实验就得不到结果，方法本身具有冒险性。（4）灵敏度没有亲和色谱高。IP实验过程CHIP原理：选择性富集包含某一特异性抗原的染色体（质）片段。能够识别某一蛋白或目的修饰蛋白的抗体被用来确定抗原在基因组中一处或多处的相对丰度。实验过程：1、分离总染色体（质）（需要通过交联使目的抗原固定在染色体（质）与其结合的部位）。2、将染色体（质）切割成片段（以提高精度）。3、对切成片段的染色体（质）进行免疫沉淀。4、免疫沉淀的染色体（质）片段进行分析，确定靶DNA序列水平与其输入的染色体（质）的相对丰度。