山羊痘病毒和绵羊痘病毒通用型荧光PCR检测方法.pdf

ICS11.220

CCSB41

团体标准

T/CVMAxxx—xxxx

山羊痘病毒和绵羊痘病毒通用型荧光PCR

检测方法

UniversalfluorescentPCRdetectionmethodforgoatpoxvirusandsheep

poxvirus

（征求意见稿）

XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

中国兽医协会发布

T/CVMAxxx—xxxx

山羊痘病毒和绵羊痘病毒通用型荧光PCR检测方法

1范围

本文件规定山羊痘病毒和绵羊痘病毒通用型荧光PCR检测方法。

本文件适用于山羊痘和绵羊痘病毒的检测及其流行病学调查、诊断、检疫和监测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

NY/T3186羊冷冻精液生产技术规程

高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本运输包装规范

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

实时荧光PCR：实时荧光聚合酶链式反应（Real-timepolymerasechainreaction）

Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值所经历的循环数（cyclethreshold）

DNA：脱氧核糖核苷酸（Deoxyribonucleicacid)

GPTV：山羊痘病毒（goatpoxvirus）

SPPV：绵羊痘病毒（sheeppoxvirus）

PBS：磷酸盐缓冲液（Phosphatebufferedsaline)

Taq酶：TaqDNA聚合酶（TaqDNAploymerase）

TEN缓冲液：Tris-EDTA缓冲液

5试剂和耗材

5.1试剂

5.1.1DNAzol，商品化DNA抽提试剂，于4℃~8℃保存。

5.1.2无水乙醇，-20℃预冷。

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T/CVMAxxx—xxxx

5.1.375%乙醇，无水乙醇和双蒸水配制，-20℃预冷。

5.1.48mMNaOH溶液，配制见附录A。

5.1.5PBS缓冲液，0.01mol/LPBS，pH7.4，配制见附录A。

5.1.6Taq酶及10倍Taq酶反应缓冲液：Taq酶浓度为5U/μL，Taq酶反应缓冲液中Mg2+浓度为15

mM。

5.1.7dNTPs：含dATP、dGTP、dCTP、dTTP各10mmol/L，-20℃保存，避免反复冻融。

5.1.8引物和TaqMan探针，其序列见附录B。

5.1.91.5mLEppendorf管。

5.1.100.2mLPCR薄壁管或八联管。

5.1.11山羊痘和绵羊痘病毒阳性对照样品：采用商品化山羊痘或绵羊痘病毒疫苗或接种了山羊痘和绵

羊痘病毒的细胞悬液或者含有山羊痘和绵羊痘病毒目的基因的核酸。

5.1.12山羊痘和绵羊痘病毒阴性对照样品：采用绵羊羔睾丸细胞悬液或健康羊肉组织。

5.2引物

山羊痘和绵羊痘病毒实时荧光PCR扩增用上、下游引物和探针序列见附录B。

6仪器与设备

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