苦瓜抗枯萎病苗期鉴定技术规程.docx

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苦瓜抗枯萎病苗期鉴定技术规程

1范围

本文件规定了苦瓜抗枯萎病苗期鉴定和抗性评价方法的术语和定义、接种体制备、鉴定方法、鉴定结果有效判断、对提供鉴定品种的要求。

本文件适用于江西省苦瓜枯萎病苗期抗性鉴定及评价。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB16715.1瓜类蔬菜作物种子第1部分：瓜类

NY/T2354植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南苦瓜

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1苦瓜枯萎病bittergourdFusariumwilt

由尖孢镰刀菌苦瓜专化型(Fusariumoxysporumf.sp.momordica,FOM)所引起的叶片网状黄化，茎叶坏死，切开病株可发现维管束变成褐色，致整株枯死的苦瓜土传病害。

4接种体制备

4.1病原物分离与保存

以常规组织分离法，从发病茎部的褐色维管束组织中分离枯萎病病原物，分离物经形态学鉴定和致病性测定确认为尖孢镰刀菌苦瓜专化型后，再进行分离物的纯化，保存备用。

4.2生理小种鉴定

对于抗病性鉴定接种的病原分离物进行生理小种的鉴定，鉴定方法参照附录A。

4.3接种体

4.3.1菌株繁殖

选择江西省苦瓜枯萎病优势生理小种菌株制备接种体。将菌株活化后，用无菌水制成孢子悬浮液，

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均匀涂抹在PDA平板上，置于26℃下培养5d~7d，待培养皿长满孢子。将枯萎病菌菌块，接种于装有灭菌的PS培养基的三角瓶中，在摇床上26℃条件下160r·min-1，恒温培养3d~5d，即可产生大量分生孢子，备用。注：PS培养基：马铃薯200g，蔗糖20g，蒸馏水1000mL，121℃高压灭菌20min。PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，121℃高压灭菌20min。

4.3.2菌悬液制备

将PS培养基培养3d~5d的菌液用四层灭菌纱布过滤。过滤后的菌液离心（4000r·min-1，5min），弃上清液。离心后的分生孢子液用无菌水稀释，用血球计数板计数分生孢子菌液浓度，使分生孢子悬浮液接种浓度调至106cfu·mL-1。过滤后的菌丝用高速组织捣碎机捣碎，加至孢子悬浮液中混匀制成接种菌悬浮液。

5鉴定方法

5.1育苗播种

播种前晒种2h~4h，经次氯酸钠溶液浸泡10min，清水冲洗后，浸种17h，浸种期间搓洗种子2~3次，种子充分吸水后取出沥干，用湿纱布包好，保湿，至于28℃~32℃培养箱内催芽，催芽期间每天搓洗1次，防止种子发霉，发芽后播种至穴盘内，盖上小拱棚遮阳保湿。当有70%~80%的幼苗出土后，揭开小棚。幼苗应生长健壮、一致。每品种3次重复，每重复15株，共45株。

5.2接种

当苦瓜幼苗长至两叶一心时，枯萎病悬浮液的制备见附录B。接种方法采用浸根移栽法接种，浸根时间为30min。

5.3调查

接种后9d进行各病情调查。调查为各参鉴品种的全部重复，记载各品种的不同等级发病株数，计算发病率及发病程度，并将品种抗性鉴定结果记入附录C。

DI=Σ(n×s)/(N×S)×100。式中：DI—病情指数，s—各病情级别的代表数值，n—各病情级别的植株数，N—调查总植株数，S—最高病情级别的代表数值。

6鉴定结果有效性判断

感病对照材料病情指数DI≥50时，该批次鉴定视为有效。

7对提供鉴定品种的要求

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提供鉴定的种子质量应符合GB/T16715.1瓜菜作物种子瓜类，供鉴定的每个品种的种子数量不少于150粒。

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附录A（资料性）

苦瓜枯萎病菌生理小种

A.1学名和形态描述

A.1.1学名

尖孢镰刀菌苦瓜专化型(Fusariumoxysporumf.sp.momordicae，FOM)。

A.1.2形态描述

肉眼观察菌落形态，发现其菌丝致密絮状，白色至淡紫色。显微镜下观测其分生孢子，小型分生孢子椭圆形，大小7.5~12.6μm×2.4~3.6μm；大型分生孢子呈镰刀形，多为3~5个隔膜，以3个隔膜的居多，大小20.3~42.2μm×2.2~4.1μm；产孢子细胞短，大小5.9~