三聚氰胺检测方法NYT...doc

前 言 本标准参考FDA实验室方法和中国检验检疫研究院实验室方法及相关文献，提出了饲料中三聚氰胺的测定方法。 本标准由康地恩生物原料运营中心提出。 本标准由康地恩生物原料运营中心归口。 本标准起草单位：康地恩生物原料运营中心（青岛）与六和集团质量安全检测中心（黄岛）。 本标准起草人：付晓。 饲料中三聚氰胺的测定 范围 本标准规定了用高效液相色谱法（HPLC）测定饲料中三聚氰胺的方法。 本标准适用于配合饲料、预混料、浓缩饲料、饲料添加剂、植物性蛋白粉、宠物饲料中三聚氰胺的测定，高效液相色谱的最低检测浓度为0.5mg/kg。 高效液相色谱法 原理 试样中的三聚氰胺用1％三氯乙酸提取，离心后取部分提取液，用阳离子交换柱净化，洗脱物用高效液相色谱仪进行定量。 试剂与材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。水为蒸馏水，色谱用水符合GB/T 6682一级用水的规定。 3.1 甲醇：色谱纯。 3.2 乙腈：色谱纯。 3.3 氨水。 3.4 阳离子交换柱(SPE柱)：60mg，3mL或150mg，6mL。 3.5 1％三氯乙酸：称取10g三氯乙酸，溶解于1000mL水中。 3.6 5％氨化甲醇：量取5mL氨水，溶解于100mL甲醇中。 3.7 乙酸铅溶液（ρ（PbAc2）=22g/L）：取22g乙酸铅，用约300mL水溶解后定容至1L。 3.8 滤膜：0.45(m，有机相。 3.9 三聚氰胺标准品（﹥99.0％）。 3.10 标准储备液（1mg/mL）：称取100mg（精确到0.1mg）的标准品，用甲醇/水（2:8，V:V）溶解并定容于100mL容量瓶中。 3.11 标准工作液：标准工作液按照需要逐级稀释配制。 4 仪器与设备 4.1 高效液相色谱仪。 4.2 离心机：10000rpm。 4.3 涡旋混合器。 4.4 氮吹仪。 4.5 固相萃取装置。 4.6 高速匀质器。 4.7 索式提取器。 5 测定步骤 5.1 提取 5.1.1 植物蛋白和饲料中三聚氰胺的提取 称取5.0g样品，准确加入48ml 1％的三氯乙酸溶液，加入2mL饱和醋酸铅溶液。摇匀，超声提取20min。取提取液约30mL转入离心管，在5000rpm离心机上离心5min。 5.1.2 宠物饲料中三聚氰胺的提取 称取5.0g样品，在索式提取器中用乙醚回流6h去除脂肪。脱脂残渣准确加入48ml 1％的三氯乙酸溶液，加入2mL饱和醋酸铅溶液。摇匀，超声提取20min。取提取液约30mL转入离心管，在5000rpm离心机上离心5min。 5.2 净化 MCX柱活化和上样：分别用3ml甲醇，3ml水活化MCX柱，准确移取10mL离心液分次上柱。再用3ml水和3ml甲醇洗涤MCX柱，抽近干后用5％氨化甲醇溶液（4.5）3ml洗脱。洗脱液于氮吹仪上50-100℃氮吹至干(或100℃水浴蒸干)，用2+8甲醇水定容，过0.45(m滤膜，滤液用于液相色谱测定。 5.3 测定 5.3.1 液相色谱条件 色谱柱：C8柱，150(4.6mm(i.d)，5(m； 柱温：40℃； 流动相：10+90（乙腈：10mM庚烷磺酸钠，10mM柠檬酸缓冲液）； 检测波长：240nm； 进样量：20(L； 标准工作液和待测样液中三聚氰胺的响应值应在仪器线性响应范围内。 结果计算和表述 按照下式计算试样中三聚氰胺的含量：W=CVn/1000m 式中： W－试样中三聚氰胺的含量，单位为毫克每公斤（mg/kg）； V－样品最终定容体积，单位为克（g），1ml约等于1g； c－由标准曲线而得的样液中三聚氰胺的含量，单位为微克每升（(g/L）； m－试样量，单位为克（g）； n— 稀释倍数。 5.5 结果表示 平行测定结果用算术平均值表示，结果保留三位有效数字。 6重复性 在同一实验室由同一操作人员使用同一仪器完成的两个平行测定的相对偏差不大于10%。 ..页眉.. ..页眉.. 页脚.. 页脚.. ..页眉.. 页脚.. ..页眉.. ..页眉.. 页脚.. 页脚.. 页脚.. 页脚.. ICS 康地恩生物原料运营中心企业标准 KDN KDN/S xxxx—xxxx 饲料中三聚氰胺的测定 Determination of Malamine in Feeds （征求意见稿） （本稿完成日期：2009年6月6日） ××××-××-××发布 ××××-××-××实施 康地恩生物原料运营中心发布