HPLC谱图常见问题原因汇总及解决方式.docx

HPLC谱图常见问题原因及解决方式汇总 液相色谱系统的许多问题都可以在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键所在。 A.峰拖尾 原因解决办法1.筛板阻塞；1．a.反冲色谱柱； b.更换进口筛板； c.更换色谱柱；2.色谱柱塌陷；2. ?填充色谱柱；3.干扰峰；3. ??a.使用更长的色谱柱； b.改变流动相或更换色谱柱；4.流动相pH选择错误；4.调整pH值，对于碱性化合物，低pH值更有利于得到对称峰；5.样品与填料表面的溶化点发生反应；5.a.加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂。b.更改色谱柱。B.峰前延 原因解决办法1.柱温低；1.升高柱温；2.样品溶剂选择不恰当；2.使用流动相作为样品溶剂；3.样品过载；3.降低样品含量；4.色谱柱损坏；4.见A1、A2；C.峰分叉 原因解决办法1.保护柱或分析柱污染；1.取下保护柱再进行分析；如果必要更换保护柱；如果分析柱阻塞，拆下来清洗；如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施；如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。2.样品溶剂不溶于流动相；2.改变样品溶剂；如果可能采取流动相作为样品溶剂；D.峰变形 原因解决办法1.样品过载；1.减少样品载量；E．早出的峰变形 原因解决办法1.样品溶剂选择不恰当；1. ?a.减少进样体积； b.运用低极性样品溶剂；F．早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 原因解决办法1．柱外效应；1. a.调整系统连接（使用更短、内径更小的管路）； b.使用小体积的流通池；G．K’增加时，脱尾更严重 原因解决办法1.二级保留效应，反相模式；1.??a.加入三乙胺（或碱性样品）； b.加入乙酸（或酸性样品）； c.加入盐或缓冲剂（或离子化样品）； d.更换一支柱子；2.二级保留效应，正相模式；2.?a.加入三乙胺（或碱性样品）； b.加入乙酸（或酸性样品）； c.加入水（或多官能团化合物）； d.试用另一种方法；3.二级保留效应，离子对；3.加入三乙胺（或碱性样品）；H．酸性或碱性化合物的峰拖尾 原因解决办法1.缓冲不合适；a.使用浓度50～100mM的缓冲液； b.使用P ka等于流动相pH值的缓冲液；I．额外的峰 原因解决办法1.样品中有其他组份；1.正常；2.前一次进样的洗脱峰；2.?a.增加运行时间或梯度斜率； b.提高流速；3.空位或鬼峰；3.?a.检查流动相是否纯净； b.使用流动相作为样品溶剂； c.减少进样体积；J.保留时间波动 原因解决办法1.温控不当；1.调好柱温；2.流动相组分变化2.防止变化（蒸发、反应等）；3.色谱柱没有平衡；3.在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱；K.保留时间不断变化 原因解决办法1.流速变化；1.重新设定流速；2.泵中有气泡；2.从泵中除去气泡；3.流动相选择不恰当；3.?a.更换合适的流动相； b.选择合适的混合流动相；L.基线漂移 原因解决办法1.柱温波动；（即使很小的温度变化都会引起基线波动；通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器；）1.控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器；2.流动相不均匀；（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移）2.使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂；流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气；3.流通池被污染或有气体；3.用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池；如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）4.检测器出口阻塞；（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）4.取出阻塞物或更换管子；参考检测器手册更换流通池窗；5.流动相配比不当或流速变化；5.更改配比或流速；为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速；6.柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；6.用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10～20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗；7.流动相污染、变质或由低品质溶剂配成；7.检查流动相的组成；使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂；8.样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。8.使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。9.使用循环溶剂，但检测器未调整。9.重新设定基线；当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相；10.检测器没有设定