HPLC_110709_24常见问题.ppt

四、色谱定量分析中常见问题及其解决方法： 1、峰形问题、坏柱； 2、样品超载、溶剂与样品不相配 ； 3、柱外效应与强保留基质、次级保留效应；  4、不合适的缓冲液、其它效应； 5、保留时间改变；  6、液相色谱方法的建立； 1、峰形问题、坏柱 拖尾 分叉 柱压升高 2、样品超载、溶剂与样品不匹配 样品超载 溶剂与样品不匹配 3. 柱外效应与强保留基质、次级保留效应 柱外效应 解决方法：加入流动相改良剂 反相色谱：加胺盐（10mM三乙胺， 针对碱性组分）与有机酸（1%醋酸，针对碱性组分） 正相色谱：类似反相色谱，加0.1%三乙胺（对碱性组分）与0.1%醋酸（对碱性组分） 离子交换色谱：增加缓冲液和盐的浓度，提高pH 4、不合适的缓冲液、其它效应； 不合适的缓冲液 5、保留时间改变 Any question ? 高效液相色谱 （High Performance Liquid Chromatography, HPLC） 高效液相色谱定量分析中常见问题及其解决方法 处理： 冲洗与倒柱 换烧结过滤片 补柱头凹陷 报废 强溶剂溶解样品的影响 a） 乙腈溶解； b) 流动相溶解 强保留基质 次级保留效应原因： 离子交换效应 痕量金属 A. 假拖尾 ——峰未分开 B. 前沿峰 ——温度、样品溶剂、柱头塌陷或滤片阻塞 C. 宽峰 D. 伪峰 样品反应 进样前的反应 分离时的反应 梯度洗脱中的反应 强溶剂溶解样品的影响 a） 乙腈溶解； b) 流动相溶解