免疫试验教学 T淋巴细胞转化试验.ppt

王迪; 主 要 内 容;实验分组及材料;原 理;有丝分裂原;;;形态学检测方法;3H-TdR掺入法;MTT法;活/增殖 期的细胞;操作流程;;实验步骤;实验步骤;细胞培养 按图所示加板。 将板做好标记，在倒置显微镜下观察细胞，然后放于37℃ 5%CO2培养箱中，培养48小时。 MTT掺入： 在终止培养前2小时，在显微镜下观察细胞转化情况。 每孔内加入MTT（5mg/ml) 20ul，加完后轻轻搕板，使MTT和细胞混匀。 在37℃ 5%CO2培养箱中继续培养2小时，取出板，观察颜色变化，然后离心2000rpm，10min，轻轻吸去上清，注意不要将孔底部的颗粒物吸出）观察板底是否有蓝色的颗粒。 加入100ul 二甲亚砜（DMSO)，轻轻晃板，将颗粒完全溶解。 结果测定： 结果测量：用酶标仪测定490nm处光密度值（OD490nm），记录结果。 结果判定： SI（刺激指数）=ConA刺激孔值 /对照孔值;ConA的倍比稀释;1;结 果 处 理;Excel 作图