优《血红蛋白的提取和分离》_图文.ppt
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@血红蛋白的提取与分离.ppt
①固定：将色谱柱处置固定在支架上 ②装填： 将（ ）一次性的缓慢倒入（ ）内，装填时轻轻敲动色谱柱，使凝胶填装均匀。 （3）凝胶色谱柱的装填方法 凝胶悬浮液 色谱柱 注意：凝胶装填时尽量紧密，以降低凝胶颗粒之间的空隙。装填凝胶柱时不能有气泡存在： 因为气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果。 ③洗涤平衡 装填完毕后，立即用缓冲液洗脱瓶，在( )高的操作压下，用300ml的20mmol/l的磷酸缓冲液（pH为7.0）充分（ ）12小时。 洗涤平衡 注意液
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3血红蛋白的提取和分离终稿.ppt
2.凝胶色谱操作 凝胶色谱柱的制作 凝胶色谱柱的装填 样品的加入和洗脱 3.SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳 高考链接 1.2009.山东 细胞分化是奢侈基因选择性表达的结果。下列属于奢侈基因的是（ ） A.血红蛋白基因 B.ATP合成酶基因 C.DNA解旋酶基因 D.核糖体蛋白基因 A 解析： 题干中给予“细胞分化是奢侈基因选择性表达的结果”，根据题干可知，找出分化的细胞中特殊成分的基因即可，四个选项中BCD是所有活细胞中都具体的基因，而A.血红蛋白基因是分化后的红细胞才表达的基因。 * 新课导入 下面请看
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血红蛋白的提取和分离经典.ppt
2、用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是A相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质B相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质C相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质D二者根本无法比较第81页,共93页，2024年2月25日，星期天3、使用SDS-聚丙烯酰胺电泳过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于A电荷的多少B分子的大小C肽链的多少D分子形状的差异4、在采血容器中加入柠檬酸钠的目的是A调节pHB维持红细胞的能量供应C防止微生物生长D防止血液凝固第82页,共93页，2024年2月25日，星期天6、记住样品处理中的血红蛋白溶
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血红蛋白的提取与分离.ppt
底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否则难以铺实尼龙网，还会导致液体残留，蛋白质分离不彻底。c.剪尼龙网小圆片覆盖在（）上，用（）的尼龙纱将橡皮塞（）包好，插到玻璃管一端。d、色谱柱下端用移液头部做（），连接一细的（），并用螺旋夹控制尼龙管的（），另一端放入收集（）的收集器内橡皮塞的凹面100目上部出口部位尼龙管打开与关闭色谱流出液插入安装了玻璃管的橡皮塞⑤安装其他附属结构。④组装：将上述三者按相应位置组装成一个整体。③顶塞的制作：2）凝胶色谱柱填料的处理（1）凝胶的选择：（）（G-75）“G”表示凝胶的交联程度，膨胀程度及分离范围。75表示凝胶的得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.
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专题五 血红蛋白的分离和提取.ppt
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血红蛋白的提取和分离试用.ppt
第1层（最上层）：甲苯层（无色透明）01第2层（中上层）：脂溶性物质沉淀层（白色薄层固体）02第3层（中下层）：血红蛋白的水溶液层（红色透明液体）03第4层（最下层）：杂质沉淀层（暗红色）04②试管中溶液层次用滤纸过滤，除去脂溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层的红色透明液体分离透析取1ml的血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300ml的物质的量浓度为20mmol/l的磷酸缓冲液中（pH为7.0），透析12小时过程除去样品中分子量较小的杂质透析目的123利用透析袋透析2、凝胶色谱打孔挖出凹穴安装移液管头部覆盖尼龙网，再用100目尼龙纱包好，插到玻璃管的一端①取长40厘米，内径1
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血红蛋白的提取与分离I.ppt
教学目标教学重点教学难点理解色谱法、电泳法等分离大分子的基本原理了解缓冲液的组成及其作用血红蛋白的分离－－样品处理凝胶色谱法的原理电泳法分离大分子的原理一、基础知识――蛋白质提取和分离原理蛋白质提取与分离的依据－－蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别。提取分离方法凝胶色谱法凝胶电泳法1.凝胶色谱法（1）原理：（2）材料大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。多孔性的多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。1.凝胶色谱法（3）分离过程混合物上柱洗脱大分子流动快小分子流动慢收集大分子收集小分子洗脱：从色谱柱上
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血红蛋白的提取和分离经典.ppt
3.样品的加入和洗脱1.调液面2.加样3.再调液面4.洗脱5.收集缓冲液凝胶第59页，共93页，星期日，2025年，2月5日①调整缓冲液面：与凝胶面平齐②滴加透析样品：加到色谱柱的（）③样品渗入凝胶床：（）④再调整缓冲液面洗脱：⑤收集：待（）接近色谱柱底端时收集顶端样品完全进凝胶层红色的蛋白质色谱柱制作成功的标志：红色区带均匀一致的移动记第60页，共93页，星期日，2025年，2月5日4、纯度鉴定（电泳）SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳判断纯化的蛋白质是否达到要求，需要进行蛋白质的鉴定。1、垂直板电泳装置2、稳流稳压电泳仪；3、微量进样器（可用微量移液器代替）第61页，共93页，星期日，2025年，
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3血红蛋白的提取与分离摘要.ppt
(2)红细胞的洗涤 ①洗涤红细胞目的 除去其中的杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少 ②洗涤操作 A、采集血样 B、低速短时间离心（速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果） C、吸取血浆：上层透明的黄色血浆 D、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤 E、低速离心（低速短时间） F、重复4、5步骤三次，直至上清液中已没有黄色，表明洗涤干净 (3)血红蛋白的释放 加蒸馏水到原血液体积，再加40％体积的甲苯 ，置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟（加速细胞破裂）,细胞破裂释放出血红蛋白 (4)分离血红蛋白溶液 ①过程 将搅拌好混合液转移到离
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课题血红蛋白的提取和分离.ppt
2.凝胶色谱操作2.1凝胶色谱柱的制作取胶皮盖打孔安装玻璃管安装尼龙网安装100目尼龙纱组装完成！第21页,共48页，2024年2月25日，星期天2.2凝胶色谱柱的装填材料：交联葡聚糖凝胶（G-75）A、固定：将色谱柱装置固定在支架上B、装填：将凝胶悬浮液一次性的装填入色谱柱内装填方法：C、洗涤平衡：装填完毕后，用磷酸缓冲液缓冲液充分洗涤平衡12小时第22页,共48页，2024年2月25日，星期天2.3样品的加样和洗脱A、调节缓冲液面B、滴加透析样品C、样品渗入凝胶床D、洗脱第23页,共48页，2024年2月25日，星期天E、收集待红色的蛋白质接近色谱柱底端时，用试管收集流出液，每5ml收集一
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血红蛋白的提取和分离shk.ppt
二实验操作1.样品处理和粗分离血液血浆水分其他物质血浆蛋白无机盐磷脂葡萄糖等血细胞白细胞血小板红细胞（最多）血红蛋白（）两个a－肽链两个β一肽链共四条肽链90％每个肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。①目的：去除（）②方法：（）离心（速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果），然后用胶头吸管吸出上层透明的（），将下层（）的红细胞液体倒入（）每个肽链环绕（），此基团可携带（）。血红蛋白因含有（）而呈红色。本课题可选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液来分离血红蛋白。一个亚铁血红素基团一分子氧或一分子二氧化碳血红素(1
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3血红蛋白的提取和分离1介绍.ppt
本课题学习目标 教学反馈 1．凝胶色谱法是根据（ ）分离蛋白质的有效方法。 A分子的大小 B相对分子质量的大小 C带电荷的多少 D溶解度 2．缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（ ）基本不变。 A温度 B pH C渗透压 D氧气浓度 3．电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（ ）的电极移动。 A相同 B相反 C相对 D相向 4.
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3血红蛋白的提取与分离介绍.ppt
(2)红细胞的洗涤 ①洗涤红细胞目的 除去其中的杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化，不可洗涤次数过少 ②洗涤操作 A、采集血样 B、低速短时间离心（速度越高和时间越长会使白细胞和淋巴细胞等一同沉淀达不到分离的效果） C、吸取血浆：上层透明的黄色血浆 D、盐水洗涤：用五倍体积的质量分数为0.9％的氯化钠溶液洗涤 E、低速离心（低速短时间） F、重复4、5步骤三次，直至上清液中已没有黄色，表明洗涤干净 (3)血红蛋白的释放 加蒸馏水到原血液体积，再加40％体积的甲苯 ，置于磁力搅拌器上充分搅拌10分钟（加速细胞破裂）,细胞破裂释放出血红蛋白 (4)分离血红蛋白溶液 ①过程 将搅拌好混合液转移到离
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《血红蛋白的提取和分离》.ppt
用凝胶色谱法分离蛋白质时，分子量大的蛋白质 A．路程较长，移动速度较慢 B．路程较长，移动速度较快 C．路程较短，移动速度较慢 D．路程较短，移动速度较快 相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的进行过程可表示为图中哪一个 练习巩固 样品的加入和洗脱的操作不正确的是 A． 加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面 B．加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内 C．等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口 D．用吸管小心的将1ml透析后的样品加到色谱柱的顶端，不要破坏凝胶面 下列是有关血红蛋白提取和分离的相
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血红蛋白的提取和分离好精要.ppt
教学反馈 1．凝胶色谱法是根据（ ）分离蛋白质的有效方法。 A分子的大小 B相对分子质量的大小 C带电荷的多少 D溶解度 2．缓冲液的作用是：在一定范围内，抵制外界的影响来维持（ ）基本不变。 A温度 B pH C渗透压 D氧气浓度 3．电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其所带电荷（ ）的电极移动。 A相同 B相反 C相对 D相向 4. 哺乳动物和人的成熟的红