仔猪粪便中乳酸菌的分离,鉴定和其抑菌特性的研究.doc

仔猪粪便中乳酸菌的分离、鉴定及其抑菌特性的研究 张素辉, 曹国文, 徐登峰, 王孝友, 蒋安 （重庆市畜牧科学院 荣昌 402460） 摘要 从健康仔猪新鲜粪便中分离到3株乳酸菌，对其进行了属和种的生化鉴定，结果为，菌株La与Lt均为嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus），Ls为乳酸乳杆菌（Lactobacillus lactis）。对分离的三株乳酸菌的代谢产物进行了体外抑菌试验研究，结果表明，3株菌乳酸菌代谢产物对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌都有较明显的抑制作用；对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最好，沙门氏菌次之，对大肠杆菌的抑菌效果相对较弱。 关键词: 乳酸菌；分离鉴定；抑菌特性 Isolation-identification and bacteriostasis-bacteriostasis of lactobacillus from piglet′s diachorema Zhang suhui, Cao Guowen, Qiu Jinjie, Xu Dengfeng, Wang Xiaoyou, Jiang-an （） Abstract Isolated strains lactobacillus from piglets fresh feces and identified its genus and strain,, results are: the Ls strain is Lactobacillus lactis, the La and Lt strains are Lactobacillus acidophilus. And carried the metabolic product of three strains in the study of inhibition activity. These experiments proved that, all the Lactobacillus’ metabolite had apparent inhibition to Colibacillus, Salmonella and Staphylococcus aureus, had the most Bacteriostasis result to Staphylococcus aureus, Salmonella was next to, and the effect with Colibacillus was more feeble. Key words lactobacillus；isolation and identification ；inhibitionactivity 仔猪腹泻，是引起起仔猪生长受阻和死亡的重要原因之一，一直是困扰养猪业发展的难题。据资料统计，我国仔猪死亡率一般波动在15-25 %之间，2周龄以内死亡率为26%，2-4周龄的死亡率为16%，断奶前后因腹泻而导致的死亡占总死亡率的49.11%[1]。以前常采用在断奶仔猪饲粮中添加抗生素的办法来控制腹泻，但抗生素病原体的耐药性问题越来越严重 作者简介：张素辉（1980-），，从事动物微生态制剂与新兽药的研究。1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 样品 健康乳猪新鲜粪便，采自多个规模化养猪场。 1.1.2 培养基 增菌及分离培养基：改良MRS培养基。 微量生化鉴定管：购自杭州微生物试剂有限公司。 1.2 方法 1.2.1菌株的分离 在改良MRS液体培养基中加入适量的新鲜乳猪粪便，富集培养24小时后，用接种环取培养液划线接种于改良MRS琼脂平皿，37℃有氧培养48-72h，挑取形态及颜色各异的菌落分别划线接种作纯培养，并进行镜检观察分离细菌的染色及形态特征。 1.2.2分离菌的鉴定 挑取平板上纯培养的革兰氏阳性无芽胞杆菌：作硝酸盐还原试验，明胶液化试验，过氧化氢酶试验，靛基质试验和硫化氢试验；作七叶苷、纤维二糖、麦芽糖、甘露醇、水杨苷、山梨醇和蔗糖发酵试验。 1.2.3乳酸菌对常见肠道致病菌的抑菌试验 乳酸菌新鲜培养液，按2%(v/v)接种于MRS液体培养基中，静置培养18-24h,取适量培养液，5000rpm,离心30min，吸取上清液备用。 临床分离保存的大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌经活化后，接种于普通肉汤中培养12h，用灭菌吸管分别吸取各菌液培养物0.5ml于普通营养平皿中，用L棒均匀涂布，待琼脂表面水分干燥后，在平板表面放置灭菌的牛津杯，取制备的乳酸菌上清液于牛津杯内测定其对常见肠道病原菌（大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌）的抑菌活性，置37℃培养10 h，观察并测定抑菌圈的大小。同时设立相应代谢产物pH值相同的MRS液体培养基作对照。 判定标准为：抑菌圈直径4 mm 判